2022 Fiscal Year Research-status Report
オルガノイドを用いた膵神経内分泌腫瘍の腫瘍免疫応答解明と新規治療薬の開発
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21K15931
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
長谷川 翔 横浜市立大学, 附属病院, 助教 (00825763)
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2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 神経内分泌腫瘍 / 同所移植モデルマウス / オルガノイド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、オルガノイド技術を用いて、膵神経内分泌腫瘍における腫瘍免疫治療効果予測が可能な細胞株およびマウスモデルの樹立である。当該年度には、マウス膵頭細胞の培養を継続して行った。手術によりマウス生体からの膵臓を切離し膵頭採取、単離培養は可能であったが、1週間を超える長期の培養は困難であった。現在様々な培養条件を試みており、今後も継続する予定である。また遺伝子改変に用いるプラスミド（Menin CRISPR プラスミド）が機能しているか、実験中である。長期培養困難である膵島細胞では現状行えないので、膵癌オルガノイド細胞に対して行っている。当該年度には、使用しているCIRSPRプラスミドのターゲット配列が、使用するマウス内にあることをデータベースから確認した。その前後の配列から、PCR用のプライマーを設計した。プライマーを用いて、目的のマウス膵癌オルガノイド細胞のDNAにPCRを行い、目的配列の増幅を行った。増幅した配列にサンガ―シークエンスを行い、プラスミドのターゲット配列が含まれていることを確認できた。現在は、遺伝子改変継続中であるが、本研究がうまくいけば、プラスミドが機能することが確認できる。よって、膵島の生存中に遺伝子改変を行うことが出来る可能性がある。膵島の遺伝子改変ができれば、マウス由来の細胞株の樹立ができ、同所移植モデルへの応用が期待できる。同所移植モデルが可能となれば、免疫解析を行うことができる可能性がある。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
マウスからの膵頭細胞の培養は可能であるが、長期培養が困難である。遺伝子改変に耐えられる細胞状態ではなく、律速段階となっている。またオルガノイドへのプラスミド導入の効率も悪く、時間を要している。
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| Strategy for Future Research Activity |
プラスミドが機能するかどうかを、引き続き安定した培養細胞で遺伝子改変を行う。機能が確認できた段階で、採取直後の膵島細胞に投与し、ノックアウト株の樹立を試みる。長期培養が難しい場合には、採取直後にプラスミドを投与し、ノックアウトを試みる。
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| Causes of Carryover |
実験計画がやや遅れており、実験試薬代金およびマウス購入費が想定より低かったため想定より低くなった。次年度は研究をすすめ、特に培養用試薬代金とマウス購入費に充てる予定である。
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