マウス小腸移植モデルを用いた小腸移植後抗体関連型拒絶反応の発症機序と治療法の解明

2022 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 21K16401
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 松島 肇 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (00644337)
• Project Period (FY): 2021-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: 小腸移植 / 抗体関連型拒絶 / マウス / 急性拒絶反応 / 補体

Outline of Annual Research Achievements

MHCハプロタイプの異なる25-30gのマウス間で同種異系間移植を行った。B6マウスの皮膚8-10x10mm^2をC3Hマウスの背部に移植した。2週間後、C3Hマウスの末梢 血を採取し、B6のsplenocytes(0.5x10^6)と室温で反応させ抗体価(IgG)をフローサイトメトリーにてMFIを測定し、抗体価が上昇していることを確認した。B6マ ウスの回腸を10cm長採取し、皮膚移植後2週間目のC3Hマウスに異所性小腸移植を行った。移植後2日目、4日目、7日目でグラフト摘出し、急性拒絶反応の程度を 皮膚移植を行っていないマウスと比較評価した。皮膚移植により前感作させたマウスに小腸を移植するとコントロールと比較して移植後2日目では急性拒絶反応 に差は認められなかったが、4日目、7日目では拒絶反応が促進され、抗体関連型拒絶が誘発されていることが示唆できた。移植後4日目のグラフトの免疫染色では皮膚移植により前感作させて群で補体C3の血管壁への沈着の有意な増加やCD20陽性細胞の粘膜固有層への浸潤促進が見られた。 今後、抗CD20抗体などで抗体産生する効果のある薬剤を投与することでいかに抗体関連拒絶が制御できるかについても検討予定である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

COVID-19感染拡大による物流停滞に伴う実験器具や試薬の搬入が遅れていること及びマウス小腸移植の手技安定に予定より時間を要した。

Strategy for Future Research Activity

小腸移植手技は安定した。今後は移植後採取したグラフトの組織学的評価を免疫染色も含めさらに詳しく行い、小腸移植後の抗体関連型拒絶のメカ ニズム解明ならびに診断に有用な特徴的病理学的所見を提唱する。さらにそれらの結果を踏まえ、抗補体抗体や抗CD20抗体などの治療効果の検討を行う。

Causes of Carryover

研究の進行が予定より遅れていることにより研究に必要な試薬や消耗品などへの研究費使用が少なかったため。
本年度実施予定であった移植組織のより詳細な免疫染色等を次年度実施するため、免疫組織学的染色に必要な各種抗体や消耗品、追加実験に必要なマウス購入に使用する予定である。