2021 Fiscal Year Research-status Report
IFNβ-1aシグナルと低酸素応答系のクロストークによる肺血管内皮バリア機能制御
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21K16542
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Research Institution | Kansai Medical University |
Principal Investigator |
角 千里 関西医科大学, 医学部, 研究医員 (00580466)
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Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2023-03-31
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Keywords | 急性呼吸窮迫症候群 / interferonβ-1a / 細胞間バリア機能 / CD73 / CD39 / 低酸素誘導性因子 |
Outline of Annual Research Achievements |
急性呼吸窮迫症候群の治療薬候補として本邦でも臨床治験が行われているInterferonβ-1a(INFβ-1a)の細胞間バリア機能への影響を解明することが本研究の目的である。この目的の達成のため血管内皮初代培養細胞,肺胞上皮・腸管上皮由来細胞株を用いて、細胞外ドメインがEcto-5'-nucleotidaseを持つCD73分子の発現とそれに依存した細胞間バリア機能維持のメカニズムを細胞生物学・分子生物学・バイオインフォマティクスを統合した手法で解明することが研究の目的であった。 今年度はこれまでの予備実験の成果を受けて以下の研究成果を得たので報告する。 ヒト臍帯静脈内皮細胞、ヒト肺微小血管内皮細胞から血管内皮バリアモデルの形成試みアッセイ系の構築に成功した。このモデルバリアを用いてINF-α, LPSがバリア機能を阻害することつまり血管の透過性を促進すること、またその透過性の亢進がINFβ-1aにより軽減されるという実験結果を得た。CD73分子の発現をmRNA(qRT-PCR法), 蛋白質レベル(特異抗体を用いたWestern blot法, フローサイトメトリ法)で検出する実験系を確立してINFβ-1aによる誘導を確認した。さらにバリア機能の形成、維持に重要な役割を果たすタイトジャンクションを構成するZO-1, Claudin5, Occuludin, VE-cadherinなどのmRNA発現を調べたところこれらの誘導が観察された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
血管内皮バリアの形成とバリア機能のアッセイ系の構築に成功し、これを用いてINFβ-1aのバリア機能増強効果が確認できたため。 さらにタイトジャンクション構成分子の動態を探る実験系の構築に成功した。
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Strategy for Future Research Activity |
タイトジャンクションを形成する蛋白質であるOccludin、Claudin-5、ZO-1、VE-cadherinの発現を蛋白質のレベルで検討する事に加えて免疫組織染色を用いて細胞内局在を調べる実験を行う。さらに次世代シーケンサを援用したRNA-Seqを行い網羅的な遺伝子発現変化を検索する。 転写因子HIFの関与を調べるため、HIF-PH inhibitorを用いてHIFの外因的な活性化を引き起こし、それによる影響を検討する。
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Causes of Carryover |
研究の遂行にあたり必要に応じて無駄のない研究費の執行に努めたため、当初の見込み額と執行額に差額が生じた。学会・研究会のオンライン開催の増加に伴い、交通費・宿泊費等が不要となったことも要因の一つである。研究計画に大きな変更はなく当初の予定通りに研究を遂行し、適切な研究費の使用に努める。
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