2023 Fiscal Year Annual Research Report
Novel Development of Gene Delivery for Inner Ear -Dual Vector Method-
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21K16832
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
大道 亮太郎 岡山大学, 医歯薬学域, 助教 (20771299)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 遺伝子治療 / 遺伝性難聴 / アデノ随伴ウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでの検討で、蝸牛が成熟している生後4週目の野生型マウスに対し、Round window membrane + Canal fenestration法（以下RWM+CF法）で2種類のAdeno associated virus (以下AAV)を内耳に導入した。血清型タイプ２（以下AAV2）、血清型タイプ９（以下AAV9）を用い、それぞれのベクターには蛍光タンパクであるeGFP（緑色蛍光）とmCherry（赤色蛍光）を組み込んだ。その際の濃度は先行研究での濃度に合わせるように、各ベクター濃度はその半分の濃度とした。具体的な濃度は以下の通りである。
注射後２週間目に聴性脳幹反応で聴力を評価したところ、注射された側の耳と対側の未治療の耳を比較しDual transductionによる聴毒性は認めないと判断した。聴力を評価した後に安楽死させた上で、側頭骨を採取し、内耳を取り出し、固定した。免疫染色を行い、共焦点レーザー顕微鏡による内有毛細胞及び外有毛細胞への感染率を検討した。
AAV2同士の組み合わせでは内有毛細胞への導入効率は96.92%とsingleの場合と同様に高効率であった。外有毛細胞に対しては、ApexとMiddleにおいて90%以上の高効率を認めた一方で、Baseに関しては効率が低下しており、全体としては65.59%と他家の報告よりも高値ではあったが、singleの効率と比較すると低下を認めた。
AAV9同士の組み合わせではBaseを除いてAAV9単独時の導入高率よりも有意に低下する傾向を認めた。
AAV2とAAV9の組み合わせではAAV2の感染率の低下は認めなかったが、AAV9の感染率は単独と比較して低下していた。
AAV2によるDual transductionは両有毛細胞においてsingleと同様に高率に導入されており、遺伝子治療における高い有用性が示唆された。
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