2022 Fiscal Year Research-status Report
Functional analysis of syndromic hearing loss and its application to gene therapy
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21K16863
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| Research Institution | Research Institute, Shiga Medical Center |
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Principal Investigator |
十名 理紗 滋賀県立総合病院(研究所), その他部局等, 主任研究員 (30717020)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2026-03-31
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| Keywords | 難聴 / 遺伝性疾患 / 症候性難聴 / てんかん / 内耳 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、非症候性難聴および症候性難聴の両者の原因となるTBC1D24遺伝子に着目し研究を進めている。CRISPR/Cas9ゲノム編集を用いて、TBC1D24の非症候性てんかんのモデルであるS324Tfs*3変異マウス、非症候性難聴DFNB86のモデルであるD70Y変異マウスおよびDFNA65のモデルであるS178L変異マウス、症候性難聴のモデルであるH336Qfs*12変異マウスを作成した。このうち、S324Tfs*3マウスは、生後2週以降にけいれん発作を起こし、生後3週で死に至ることがわかっている。
Tbc1d24のS324Tfs*3変異はマイクロエクソン上にあり、S324Tfs*3マウスにアンチセンスオリゴヌクレオチド (ASO: Antisense Oligonucleotides) を投与することによって、てんかん発作の抑制や生存期間が延長されるかをアウトカムとし、今後のヒトに対する遺伝子治療への応用を目的としている。2022年度までにTbc1d24遺伝子のS324Tfs*3変異マウスおよびコントロールマウスの腎細胞を用いてprimary cell lineを作成した。また、マイクロエクソンに作用する複数のASOを設計し、primary cell lineに対してどの配列のASOが最も効果があるかを評価した。2022年度は、in vitroで効果の高かったASOを2種類選択し、実際に変異マウスへの投与を開始した。
一方、TBC1D24と相互作用するタンパク質としてKIBRAを同定した。TBC1D24はTBCドメインとTLDｃドメインからなるが、これまでの研究でマウスのKIBRAは、TBC1D24のTLDcドメインと相互作用することを明らかにした。2022年度は、これまで相互作用を確認していたマウスでの配列に加え、ヒトでの配列においても相互作用するかを評価した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ASOを用いた遺伝子治療に関しては、おおむね計画通りに研究が進んでいる。TBC1D24と相互作用するタンパク質の機能解析に関しては、マウスにおけるタンパク質の配列で評価するのに加え、ヒトの配列でも評価を追加したため予定よりはやや遅れているが、全体としての研究はおおむね順調である。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究はおおむね計画通りに行われているので、今後も研究計画通りに研究を進めていく。
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| Causes of Carryover |
参加を予定していた国際学会にCovid-19の影響で参加できなかったため、次年度繰り越し使用とする。
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