2023 Fiscal Year Research-status Report
芳香族炭化水素受容体活性検出法を用いた繊維製品中有害物質スクリーニング法の確立
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21K17281
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| Research Institution | Kanagawa Prefectural Institute of Public Health |
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Principal Investigator |
西 以和貴 神奈川県衛生研究所, 理化学部, 主任研究員 (80761882)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 芳香族炭化水素受容体 / 繊維製品 / 有害物質 / スクリーニング / AhR / 安全性評価 / 核内受容体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
AhR活性の検出法として、7-ethoxyresorufin-O-deethylase(EROD)法とルシフェラーゼレポーターアッセイ法の2種を併行して検討した。いずれもヒト肝がん由来細胞であるHepG2細胞を用いた。ルシフェラーゼレポーターアッセイ法については、AhR応答性のルシフェラーゼ遺伝子を含むプラスミドを用い、これをHepG2細胞に導入した。導入後の細胞を選別し、当該遺伝子を安定発現する細胞株を樹立した。検討の結果、いずれの方法でも市販繊維製品抽出液のAhR活性を検出できることがわかったが、ルシフェラーゼレポーターアッセイ法の方が簡便なため、以降の検討ではこちらを用いた。
次に、市販の繊維製品を店舗にて購入し、実態調査を行った。試料は細切後抽出し、その抽出液のAhR活性を調べた。その結果、いくつかの製品からAhR活性を検出した。その内一つの製品について、AhR活性の要因となる化学物質の探索を行った。
当該製品の抽出液について、液液分配、固相カートリッジで分画を行い、活性の検出される画分を特定した。さらに、高速液体クロマトグラフィーによる分取を行い、活性の要因と思われるピークを特定した。このピークを高速液体クロマトグラフ/高分解質量分析装置（Orbitrap-LC/MS）で分析し、標準品と比較したところ、活性の要因となる化学物質を同定することが出来た。
さらに、同定した化学物質と同じ用途で用いられる化学物質のAhR活性を調べたところ、そのいくつかからAhR活性が検出された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
AhR活性物質を1つ同定できたことから、本研究のアプローチの有効性を確認できた。また、同定した化学物質と同じ用途で用いられる化学物質を調べたところ、いくつかの化学物質でAhR活性が検出された。このことから、本研究のアプローチで1つの化学物質を同定することが出来れば、その結果をさらに展開し、同様の作用を持つ化学物質を複数見つけることが可能であることがわかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
AhR活性が検出された別の製品についても同様のアプローチで原因物質の特定を行う。
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| Causes of Carryover |
物品が想定よりも安価に購入できたため。
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