2022 Fiscal Year Research-status Report
Development of a novel material, lectin-silk, using various types of fish lectins.
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21K18225
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
杣本 智軌 九州大学, 農学研究院, 准教授 (40403993)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
筒井 繁行 北里大学, 海洋生命科学部, 准教授 (20406911)
小島 桂 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 生物機能利用研究部門, 上級研究員 (40370655)
佐藤 充 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 生物機能利用研究部門, 上級研究員 (90391565)
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| Project Period (FY) |
2021-07-09 – 2025-03-31
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| Keywords | 魚類レクチン / シルクタンパク質 / 新規タンパク質素材 / カイコ / 組換えタンパク質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度は、トラフグ由来のペントラキシン(PTX)、ネコザメ由来のC-typeレクチン(HjCL)の2種類のレクチンをレクチンシルクの導入レクチンの候補とした。本年度は新たな魚類のレクチンの候補として、マダイ由来のCq1-likeレクチン（Cq1-like）を選定した。Cq1-likeも他のレククチン分子と同様にマウスDO-11.10細胞へ遺伝子導入後、ウェスタンブロッティングで発現を確認した。次に死菌サンプルをコーティングしたプレートに抗Myc-tag精製キットで精製したCq1-likeを反応させた。対照区と比較し顕著な結合はみられなかったが、菌に対する結合がみられたため、Cq1-likeもレクチンシルクの候補とした。PTX、 HjCL、Cq1-likeの3種類の魚類レクチンとフィブロインＬ鎖を融合した組換えカイコ用のコンストラクトをそれぞれ作製した。これら3種類のコンストラクトを混合し、カイコ卵にマイクロインジェクションした。1回目、425粒にマイクロインジェクションし結果、151頭が孵化し67蛾区のG1を得た。次に213粒にインジェクションし56頭が孵化し10蛾区のG1を得た。3回目、418粒にインジェクションし、120頭が孵化し13蛾区のG1を得た。しかしながら、3回すべてにおいて、組換えカイコは得られなかった。現在、4回目のインジェクションに向けて準備を進めている。
また、レクチンシルクの候補となるハタ科の体表粘液レクチンを同定した。今後、このレクチンがレクチンシルクの候補となるのか病原体への結合性を調べる予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
3回マイクロインジェクションを実施し、組換えカイコの作製を試みたが、不受精卵が多く組換え体を得ることができなかった。本年度中に第一世代を得る予定だったため、やや進捗状況は遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
トラフグ由来のペントラキシン(PTX)、ネコザメ由来のC-typeレクチン(HjCL)、マダイ由来のCq1-likeレクチン（Cq1-like）を発現するシルクタンパク質「レクチンシルク」の作製を継続する。また、様々な病原体に結合する魚類新規レクチンの探索も継続して続ける。
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| Causes of Carryover |
カイコの組み換え体が作製が得られず、組換えシルクタンパク質を得ることができなかった。このため、組換え体がえられたときを想定し、予算を翌年度に持ち越した。
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