2022 Fiscal Year Research-status Report
人工プライベートシャペロンシステムの構築と難発現タンパク質生産への応用
| Project/Area Number |
21K19084
|
|---|
| Research Institution | Okayama University |
|---|
Principal Investigator |
安井 典久 岡山大学, 医歯薬学域, 准教授 (90467514)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山下 敦子 岡山大学, 医歯薬学域, 教授 (10321738)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2021-07-09 – 2024-03-31
|
| Keywords | 分子シャペロン / 人工タンパク質 / 難発現タンパク質 / プライベートシャペロン / 組換えタンパク質 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
当初の研究目的および研究実施計画にしたがい，自然に見出されるプライベートシャペロンとその基質タンパク質のペアを人工的に再構成することを目指し，基質タンパク質に結合する人工タンパク質の取得にとりかかった。また，ファージディスプレイライブラリーからの人工タンパク質の選別過程そのものに問題がないかを検証する必要が考えられた。主な成果は以下の通りである。(1) プライベートシャペロンHSP47の基質であるコラーゲンに結合することが報告されているタンパク質やペプチドを提示したファージを新しく準備した。しかし，これらのコラーゲンへの結合を確認できなかった。このことから，選別過程に問題があるか否かについては，検討することはできなかった。(2) 新しい設計に基づく人工タンパク質のファージディスプレイライブラリーを構築するために，組合せ変異導入箇所の妥当性に関する基礎的データを取得した。(3) 人工タンパク質の骨格となる一本鎖モネリンについて，1残基の変異導入により熱安定性が向上することを見いだした。これにより，より有用な新しい人工タンパク質のファージディスプレイライブラリーを作製できる可能性が高まった。(4) 別のプライベートシャペロンRAPとLAモジュールペアの再構築に関して，すでに得ていたLDL受容体のLA2に結合する人工タンパク質のLDL受容体細胞外領域に対する分泌効率への影響を調べた結果，ほとんど分泌効率には影響がなかった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
コラーゲンに対する人工タンパク質の取得が遅れている一方で，新しい人工タンパク質のファージディスプレイライブラリー構築の基礎的データが多数得られたことから，上記のような進捗状況であると自己判断した。
|
| Strategy for Future Research Activity |
新しく人工タンパク質のファージディスプレイライブラリーの作製とその選別を行うことにより，コラーゲンに結合する人工タンパク質の取得を目指す。一方で，LDL受容体の各ドメインに結合する人工タンパク質は順調に得られており，それらのシャペロン機能の有無について，培養細胞を用いて検証を進める。
|
| Causes of Carryover |
研究の進展を勘案し，物品購入の支出が当初予定額よりも少なくなったため。
|
Research Products
(6 results)
