2023 Fiscal Year Annual Research Report
Development of novel method for visualizing fish spermatogonia using transferrin receptor
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21K19138
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| Research Institution | Tokyo University of Marine Science and Technology |
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Principal Investigator |
市田 健介 東京海洋大学, 学術研究院, 助教 (70882637)
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| Project Period (FY) |
2021-07-09 – 2024-03-31
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| Keywords | 生殖細胞移植 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者らは本分子の特性を用いて蛍光標識トランスフェリンおよび蛍光標識鉄をA型精原細胞に取り込ませることによる生体染色の樹立を最終目標として、実際にtfr1のニジマス精巣および精巣細胞に対しての発現解析を行った。当該遺伝子のRNAプローブを作成しin situ hybridizationを行いmRNAの局在を観察した結果、tfr1はニジマス精巣におけるA型精原細胞にて優先的に、B型精原細胞にて弱く発現していることが明らかとなり、当初の目的を遂行する上で有利な遺伝子であることが示された。さらにtfr1アミノ酸の細胞膜領域外2か所に対しポリクローナル抗体を作成し、タンパク質に対しての発現解析を行った。その結果、組織切片においてはin situ hybridizationと同様の発現パターンが観察され、タンパク質においてもmRNAと同様にA型精原細胞において優先的に発現していることが明らかとなった。さらにそれらの抗体を用いてニジマス精巣細胞を酵素分散した生細胞に対してtfr1抗体を用いて染色した結果、一部のA型精原細胞のみをヘテロに染色することが明らかとなった。また、最終年度においては生体染色を行うためにトランフェリンに蛍光色素のAcidiFluor ORANGEを標識した蛍光トランスフェリンを用いて、ニジマス精原細胞の染色を試みたが、ニジマス生殖細胞特異的、あるいはtfr1抗体と一致する形のシグナルは得られなかった。しかしながら、tfr1抗体を用いて染色した一部のＡ型精原細胞を分取し、ニジマス孵化稚魚に対する移植実験を行った結果、tfr1抗体陽性のＡ型精原細胞は抗体陰性のＡ型精原細胞と比較して高い値を示し、tfr1は生着能の高い細胞を標識できる可能性が示唆された。
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