2021 Fiscal Year Research-status Report
Development of antibody-fusion proximity biotinylation enzyme for analysis of virus entry
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21K19230
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| Research Institution | Ehime University |
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Principal Investigator |
澤崎 達也 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 教授 (50314969)
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| Project Period (FY) |
2021-07-09 – 2023-03-31
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| Keywords | 近位依存性ビオチン化酵素 / AirID / ウイルス / 新型コロナウイルス / レンチウイルス / 感染症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題はレンチウイルスをモデルに、１）ウイルス認識抗体FabにAirIDが融合した抗ウイルス-AirIDの構築、２）抗体-AirIDを付与されたウイルスの作製、３）ウイルス表面タンパク質のビオチン化の検証、４）細胞への感染能の確認、５）抗体-AirID付与ウイルス感染細胞におけるビオチン化宿主タンパク質の同定、からなる5項目により技術開発を行う。
そこで本年度は、上記１）~３）の研究項目を進めた。その結果、レンチウイルスを用いて１）レンチウイルスのエンベロープ膜タンパク質であるVSV-Gを認識するモノクローナル抗体のFab遺伝子にAirIDを融合した抗VSV-G-AirIDを構築した。またパンデミックに対応するため新型コロナウイルスのVSV-GをSARS-CoV-2のSタンパク質に置換したSARS-CoV2-S-レンチウイルスの作製を行い、Sタンパク質を認識するモノクローナル抗体のFab遺伝子にAirIDを融合した抗SARS-CoV2-S-AirIDを構築した。
２）HEK293T細胞を用いてルシフェラーゼ遺伝子を含有するVSV-G型およびARS-CoV2-S型レンチウイルスを作製し、密度勾配遠心法で単離・濃縮後、抗VSV-G-AirIDもしくは抗SARS-CoV2-S-AirIDとレンチウイルスを混合する。その結果、抗VSV-G-AirID付加レンチウイルスおよび抗SARS-CoV2-S-AirID付加レンチウイルスの作製に成功した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
新型コロナウイルスの研究に対応できるように、対象ウイルスタンパク質としてSARS-CoV2のSタンパク質を対象に加えた。
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| Strategy for Future Research Activity |
本研究課題はレンチウイルスをモデルに、１）ウイルス認識抗体FabにAirIDが融合した抗ウイルス-AirIDの構築、２）抗体-AirIDを付与されたウイルスの作製、３）ウイルス表面タンパク質のビオチン化の検証、４）細胞への感染能の確認、５）抗体-AirID付与ウイルス感染細胞におけるビオチン化宿主タンパク質の同定、からなる5項目により技術開発を行う。
そこで本年度は、上記１）~３）の研究項目を進めた。その結果、レンチウイルスを用いて１）レンチウイルスのエンベ
今年度は、上記１）と２）を行ったため、今後は、上記３）~ 5）を推進する。
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| Causes of Carryover |
受託解析の支払いが4月にあるため。
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Research Products
(18 results)
