細胞内新生Sタンパクを標的とした新規COVID-19治療薬の開発

2023 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 21K19344
• Research Institution: Doshisha University
• Principal Investigator: 西川 喜代孝 同志社大学, 生命医科学部, 教授 (40218128)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 和久 剛 同志社大学, 生命医科学部, 准教授 (40613584)
• Project Period (FY): 2021-07-09 – 2024-03-31
• Keywords: 新型コロナウイルス / Sタンパク / ペプチドライブラリースクリーニング

Outline of Annual Research Achievements

１）SタンパクのRBD(S1-RBD)を標的としたペプチド性阻害薬の同定（西川・和久）；多価型ランダムペプチドライブラリーシートスクリーニング法による高親和性RBD結合モチーフの取得を行った。スクリーンングにあたっては、F486A-S1-RBDよりも野生型S1-RBDにより強く結合することを指標にした。本年度では、4次スクリーニングの結果に基づき、２系統５種のライブラリーを作成し、５次スクリーニングを行なった。５次スクリーニングの結果に基づき、１系統６種のライブラリーを作成し、６次スクリーニングを行なった。６次スクリーニングの結果に基づき、１系統９種のライブラリーを作成し、最終段階となる７次スクリーニングを行なった。その結果、最終的に１０種の候補モチーフを決定した。取得した１０種のモチーフを多価型ペプチドライブラリーと同じ核構造に組み入れ、４価型ペプチドを合成した。

２）取得した４価型ペプチドのRBD受容体結合活性阻害能の評価（西川）；RBDのACE2結合活性はELISAにて評価した。本結合に対する、取得した１０種（#1-10）の４価型ペプチドの容量依存的阻害活性を評価した。positive controlとして、RBDとの結合に関与することが知られているACE2領域の22アミノ酸からなるペプチド（ACE2pep）を用いた。これまでに４種について活性評価を行なった。その結果、ACE2pepは300 microMを使用しても50 %阻害に至らないのに対し、３種については0.1-0.3 microMで50 %阻害を引き起こすこと、さらに興味深いことに１種についてはRBDとACE2との結合を阻害するどころか、容量依存的に結合を増加させ、1 microMでは1.5倍に結合活性を増強させることを見出した。