2021 Fiscal Year Research-status Report
Basic research about fluid-fluid phase separation and membraneless organelles in sarcoma
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21K19571
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
秋末 敏宏 神戸大学, 保健学研究科, 教授 (90379363)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
竹森 俊幸 神戸大学, 医学部附属病院, 医員 (20884456)
河本 旭哉 神戸大学, 医学部附属病院国際がん医療・研究センター, 特命講師 (30420558)
原 仁美 神戸大学, 医学部附属病院, 助教 (40437489)
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| Project Period (FY) |
2021-07-09 – 2024-03-31
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| Keywords | 肉腫 / 細胞内小器官 / 相分離 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
2021年度（令和3年度）においては、既に細胞株として市販されている細胞株および当研究室で樹立した細胞株（骨肉腫：KHOS, KTHOS, MG63, SaOS2, LM8 軟部肉腫細胞株：TNMY-1, Nara-H, Nara-F, GBS-1 ユーイング肉腫細胞株：SK-ES-1, RD-ES）を細胞を継代培養し、実験に供するための準備を行った。これらの細胞株をsubconfluentな状態で細胞を回収し、先行研究で報告されているストレス顆粒関連蛋白であるTIA-1 (T-cell-restricted intracellular antigen-1), TIAR (TIA-1-related protein), G3BP1 (RAS GTPase-activating protein-binding protein 1), G3BP2 (RAS GTPase-activating protein-binding protein 2) , CAPRIN-1 (Cell Cycle associated protein 1) , USP10 (Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 10)の遺伝子発現を定性的および定量的に評価するため、mRNAの抽出とcDNAライブラリーの作成を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
2021年度（令和3年度）においては、必要な細胞株の培養条件等の設定に時間を要し、また、ストレス顆粒関連蛋白の遺伝子発現を捉えるためのプライマー準備等に時間を要したため、実験の進捗が遅れた。
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| Strategy for Future Research Activity |
2022年度（令和4年度）においては、ストレス顆粒関連蛋白であるTIA-1 (T-cell-restricted intracellular antigen-1), TIAR (TIA-1-related protein), G3BP1 (RAS GTPase-activating protein-binding protein 1), G3BP2 (RAS GTPase-activating protein-binding protein 2) , CAPRIN-1 (Cell Cycle associated protein 1) , USP10 (Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 10)の遺伝子発現を定性的および定量的に評価する。また、蛋白発現を認めた細胞株においては、培養細胞の免疫組織化学染色を行い、細胞内の蛋白局在を共焦点レーザー顕微鏡にて観察を行う。さらに、低酸素状態（酸素１％および5％）と通常酸素状態（酸素20％）にて培養後、ストレス顆粒関連蛋白の遺伝子発現および蛋白発現を比較する。
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| Causes of Carryover |
2021年度（令和3年度）においては、遺伝子発現を定性的および定量的に評価および培養細胞の免疫組織化学染色を行い、細胞内の蛋白局在を共焦点レーザー顕微鏡にて観察、さらに、低酸素状態（酸素１％および5％）と通常酸素状態（酸素20％）にて培養後、ストレス顆粒関連蛋白の遺伝子発現および蛋白発現を比較する予定であったが、実験の遂行が遅れたため、これらの実験に必要な試薬等の購入を行わなかった。2022年度（令和4年度）においては、未実施の実験を速やかに行い、当初計画した2022年度（令和4年度）とともに使用する試薬等の購入に充てる。
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