2021 Fiscal Year Research-status Report
ゲノムワイドCRISPRスクリーニング法を用いた糖尿病性腎症の新規創薬・病態解明
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21K19692
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
菅原 明 東北大学, 医学系研究科, 教授 (90270834)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岩渕 好治 東北大学, 薬学研究科, 教授 (20211766)
横山 敦 東北大学, 医学系研究科, 准教授 (20572332)
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| Project Period (FY) |
2021-07-09 – 2023-03-31
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| Keywords | 糖尿病性腎症 / ChREBP / Txnip / CRISPR-Cas9 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は、当該年度の下記の成果を得た。
１)D532の標的遺伝子の解析：我々は野生型マウス群、1型糖尿病性腎症モデルマウスであるiNOS-トランスジェニック（TG）マウス＋Vehicle群、iNOS-TGマウス＋D532群の各腎臓から抽出したRNAを用いて、RNA-Sequenceを施行した。その結果、Lpk、Fis1、Kcnb1、Dguok、Slc25a15といったChREBPの標的遺伝子に加えて、Txnipも野生型マウス群に比してiNOS-TGマウス群でその発現が著明に増加していた一方で、iNOS-TGマウス＋D532群では発現が顕著に減少していることが明らかとなった。また、GO enrichment analysisでも細胞内シグナル伝達経路やアポトーシス経路の有意な変動が観察された。以上の結果から、TxnipがD532の下流に存在することが確認された。現在、更なるパスウェイ解析を行うことにより、D532作用時の腎臓におけるTxnipの上流遺伝子を検索中である。２）CRISPR-Cas9システムによるChREBP KOマウスの作成：ChREBPのDNA結合ドメインであるヘリックス-ループ-ヘリックス構造（Exon 13～14内）を含むExon 12からExon 14を認識するcrRNAを作製し、マウス受精卵（B6N×B6N）に対してエレクトロポレーション法によりCas9 protein 100 ng/μL、100 ng/μL crRNAs、100 ng/μL tracrRNAを導入した。作製した受精卵は偽妊娠雌マウスの卵管に導入し、変異マウスは胎生19日目に出生した。得られたChREBP KOマウス腎臓でのChREBP欠損はWestern blotによって確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
RNAシークエンスにてTxnipがD532の標的遺伝子であることが明らかとなり、パスウェイ解析によりTxnipの上流遺伝子もほぼ明らかになったことから、おおむね順調に進展していると考えられた。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後はRNAシークエンスの結果を更に詳細に解析することに加え、CRISPR-Cas9システムにより得られたChREBP KOマウスを用いたRNAシークエンスも施行することにより、糖尿病性腎症の病態解明ならびにTxnipを標的とした新規創薬を進める。
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[Journal Article] A novel 8.57-kb deletion of the upstream region of PRKAR1A in a family with Carney complex.2022
Author(s)
Ito S, Hashimoto A, Yamaguchi K, Kawamura S, Myoen S, Ogawa M, Sato I, Minato T, Miyabe S, Nakazato A, Fujii K, Mochizuki M, Fujimori H, Tamai K, Niihori T, Aoki Y, Sugawara A, Sasano H, Shima H, Yasuda J.
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Journal Title
Mol Genet Genomic Med .
Volume: 10
Pages: e1884.
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Identification and Functional Characterization of a Novel Androgen Receptor Coregulator, EAP1.2021
Author(s)
Yokoyama A, Kouketsu T, Otsubo Y, Noro E, Sawatsubashi S, Shima H, Satoh I, Kawamura S, Suzuki T, Igarashi K, Sugawara A.
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Journal Title
J Endocr Soc.
Volume: 5
Pages: bvab150
DOI
Peer Reviewed
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