イヌアデノウイルスの新規タンパク質の機能解析

2022 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 21K20612
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 松郷 宙倫 京都大学, 医生物学研究所, 助教 (40907408)
• Project Period (FY): 2021-08-30 – 2023-03-31
• Keywords: アデノウイルス / 獣医学 / ベクター

Outline of Annual Research Achievements

申請者は、これまでにイヌアデノウイルス2型（CAdV2）がウイルスの増殖性に関わる新規タンパク質Xをコードしていることを明らかにしたが、その機能は不明 であり、本研究ではその機能、分子機構の解明を目的とした。昨年度はXタンパク質に対する抗体を用いた共免疫沈降法によってXに結合する宿主因子の同定を試みたが、抗体の非特異的な結合が多く、同定することはできなかった。そこで、本年度はタグをつけた組換えXタンパク質を哺乳類細胞に発現させて共免疫沈降法によってXに結合する宿主因子の同定を試みた。Xタンパク質の精製には成功したものの、発現量が非常に低く、その後の解析に進めることはできなかった。
機能的な面について解析するために、X欠損ウイルスと野生型ウイルスの細胞変性効果を比較すると、野生型ウイルス感染細胞の方が細胞死を起こしている割合が高かった。そこでその機序について調べるために、細胞死に関連する様々な宿主の遺伝子をノックアウト（KO）したMDCK細胞を樹立し、X欠損ウイルスと野生型ウイルスを感染させた。しかしながら、各遺伝子をKOした細胞においても野生型細胞と同様のCPEが認められ、解析した遺伝子はXによる細胞死と関係していないことが示唆された。
本研究により、Xは非構造タンパク質であり、細胞死を誘導し、ウイルスの細胞外への放出を促進する機能をもつことがわかった。また、CAdV2のみならず、CAdV1やコウモリアデノウイルスにおいても保存されていることがわかった。本研究成果はアデノウイルスの病原性の解析、効率的なベクターの産生やワクチン開発などに貢献する。