2022 Fiscal Year Annual Research Report
RNA editing with membrane-permeable guide RNA
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21K20713
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
秤谷 隼世 名古屋大学, 理学研究科, 研究員 (10890618)
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| Project Period (FY) |
2021-08-30 – 2023-03-31
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| Keywords | 核酸化学 / 核酸DDS / ジスルフィド / 核酸医薬 / RNA編集 / ケミカルバイオロジー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、細胞膜をintactで直接透過するガイドRNAをデザイン・合成し、これによりRNA編集を達成することである。本目的を達成するための初年度マイルストン通り、今年度は①細胞膜透過性ユニットの化学合成、②そのユニットを結合したオリゴRNAの化学合成、③以上から得られたオリゴRNAの細胞膜透過性の評価を行った。
①：所属する研究室が取り組んできた先行研究の知見をもとに、細胞膜の直接透過を促進するようなジスルフィド構造の最適化に取り組んだ。その結果、環状ジスルフィド構造を核酸に付与できるような合成原料アミダイト2種類（直接修飾型・ポスト修飾型）の合成に成功した。
②：得られた2種類のアミダイト原料を用い、核酸自動合成機によって複数種類のRNAオリゴ核酸を合成した。直接修飾型による合成ではやや合成収率が低下したものの、細胞実験に十分な量のオリゴRNAの合成に成功した。ポスト修飾型による合成では、脱保護条件を最適化することにより、核酸自動合成機でアミノ基を有するユニットを付与したのちにNHSエステル反応を経ることでオリゴRNAにジスルフィド構造を付与することができた。
③：ユニットを有するオリゴRNAの3’末端に蛍光プローブを導入した配列を設計・合成し、フローサイトメーターによる細胞内取り込み評価を行った。その結果、ポスト修飾型のユニット構造を有する修飾オリゴRNAでは、コントロール配列と比較して3-5倍程度の蛍光強度が観察された。
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