2022 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidating novel molecular mechanisms of neuromuscular disorders due to impaired ribosomal rRNA processing
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21K20745
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
市野 紀子 順天堂大学, 大学院医学研究科, 特任研究員 (40649365)
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| Project Period (FY) |
2021-08-30 – 2023-03-31
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| Keywords | リボソーム生合成 / gar1 / p53 / 骨格筋発生 / アポトーシス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
リボソーム生合成に関わるGAR1を欠損したゼブラフィッシュGBT0434変異体(gar1mn0434Gt/mn0434Gt)において、サルコメア異常が見られることから、gar1欠損ゼブラフィッシュに発現する骨格筋萎縮の病態メカニズムを明らかにするため、令和3年度は、GAR1欠損によるH/ACA snoRNP機能異常による骨格筋萎縮が、p53依存的または非依存分子メカニズムのどちらを介するのかを検証した。はじめに、Morpholino Antisense Oligonucleotide（MO）を用いて、GBT0434変異体(gar1mn0434Gt/mn0434Gt)におけるp53タンパク質の翻訳を抑制することにより、骨格筋におけるp53依存的なアポトーシス誘導を阻害したところ、GBT0434変異体の骨格筋病変の改善は見られなかった。さらに、アイソフォームΔ113p53は、bcl2lを介してp53によるアポトーシスを抑制する働きを持つことから、定量的逆転写PCR法を用いてp53およびΔ113p53 mRNAの発現量を測定すると、gar1mn0434Gt/mn0434Gtはp53 mRNAの減少とΔ113p53 mRNAの増加が見られた。さらに、WTとgar1mn0434Gt/mn0434Gt の両者にMOを導入してp53をノックダウンするとgar1mn0434Gt/mn0434GtにおいてΔ113p53 mRNAの発現のみが顕著に増加することが明らかとなった。これらの結果は、gar1欠損によりp53非依存的な経路を介して少なくともΔ113p53の発現増加が誘導され、さらにその下流シグナル伝達経路を介したアポトーシスにより骨格筋発生が障害される可能性を示唆している。さらに本研究で計画しているRNA sequencing解析を実施するため、サンプリング方法の検討を行った。
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