2022 Fiscal Year Annual Research Report
クリミア・コンゴ出血熱ウイルスによるRNA修飾制御機構の解析
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21K20761
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
平野 港 長崎大学, 高度感染症研究センター, 助教 (30901029)
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| Project Period (FY) |
2021-08-30 – 2023-03-31
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| Keywords | アルボウイルス / ウイルス複製 / RNA修飾 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
クリミア・コンゴ出血熱ウイルスは致死的な感染症を引き起こし、治療法開発のため感染機構の基盤情報が必要とされている。本研究では同ウイルスの核タンパク質 (N) はRNA修飾を介し、ウイルス複製促進/宿主免疫制御を行う機構を持つのではないかという仮説のもと、解析を行う。申請者らが樹立したウイルスの複製評価系であるミニゲノム系、およびtrVLPs系等を用いて解析を行う。CCHFV Nタンパク質のアデニルメチル基転移酵素様モチーフであるNPPYモチーフに変異を導入した変異体を作出し、解析を行った。ミニゲノムの活性化によるLuciferase活性を測定したところ、変異導入において優位な活性減少が認められた。NPPYモチーフがウイルス複製を促進する因子であることが示された。次に、宿主RNA修飾関連因子のノックダウンを行い、HAZVを用いた感染モデルにてウイルス複製への影響を評価した。結果、一部RNAを修飾促進因子のノックダウンにおいて力価の優位な減少が認められた。修飾RNAを免疫沈降後、RT-qPCRによりミニゲノムRNA量を定量したが、顕著な変化は認められなかった。その為、RNA修飾の影響は宿主RNAに及ぼされていると考え、N発現ヒト細胞における次世代シークエンスによるトランスクリプトーム解析を実施した。Nの発現により一部遺伝子パスウェイの顕著な変動が認められたが、これらがRNA修飾依存的な変化を示すためにはさらなる解析が必要な結果となった。
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