2010 Fiscal Year Annual Research Report
ウイルスによる植物の抵抗性システムの回避と利用の分子機構
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22248002
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
奥野 哲郎 京都大学, 農学研究科, 教授 (00221151)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三瀬 和之 京都大学, 農学研究科, 准教授 (90209776)
海道 真典 京都大学, 農学研究科, 助教 (20314247)
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| Keywords | 植物ウイルス / RNAウイルス / RNAサイレンシング / 非宿主抵抗性 / poly(A)結合タンパク質 / RNA複製酵素 / 翻訳因子 / ヒートショックタンパク質 |
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| Research Abstract |
ウイルスRNA複製複合体に含まれる候補宿主タンパク質の分離・同定
エピトープタグ付加p27を用い、RCNMV感染葉の膜画分に含まれるRCNMV RNA複製複合体を精製し、質量分析を行った。その結果、Hsp70とHsp90などのシャペロンをはじめsmall GTPaseであるArf1など多くの宿主タンパク質を同定した。興味深いことに,本画分をBlue Native PAGEで分画した後に得られたRNA複製複合体(480kDa)にはこれらのシャペロンタンパク質やArf1は検出されなかった。これらのことからHsp70、Hsp90、Arf1は、RNA複製複合体形成過程で重要な働きをするタンパク質であることが示唆された。
ウイルスゲノムRNAに結合する宿主タンパク質の分離・同定
RNA1の3'非翻訳領域(UTR)のadenine-rich領域にpoly(A)結合タンパク質(PABP)が結合することを明らかにした。PABPの結合を阻害するRNA変異は、キャップ非依存的翻訳活性を阻害した。また,ファージMS2の外被タンパク質(MS2CP)結合配列とMS2CP融合PABPを用いたテザードアッセイから,RNA13'-UTRのadenine-rich領域へのPABPの結合がキャップ非依存的翻訳活性で重要であることが明らかとなった。
ウイルスタンパク質の機能ドメインの同定
タンパク質問相互作用とRNA複製複合体(480kDa)形成、及びRNA結合に必要なp27のドメインとアミノ酸を同定した。
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[Journal Article] Identification of amino acids in auxiliary replicase protein p27 critical for its RNA-binding activity and the assembly of the replicase complex in Red clover necrotic mosaic virus2011
Author(s)
Hyodo, K., Mine, A., Iwakawa, H., An, M., Kaido, M., Mise, K., Okuno, T.
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Journal Title
Virology
Volume: 413
Pages: 300-309
Peer Reviewed
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[Journal Article] A Y-shaped RNA structure in the 3'untranslated region together with the transactivator and core promoter of Red clover necrotic mosaic virus RNA2 is required for its negative-strand RNA synthesis2010
Author(s)
An, M., Iwakawa, H., Mine, A., Kaido, M., Mise, K., Okuno, T.
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Journal Title
Virology
Volume: 405
Pages: 100-109
Peer Reviewed
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[Journal Article] Identification and Characterization of the 480 kDa Template-Specific RNA-Dependent RNA Polymerase Complex of Red Clover Necrotic Mosaic Virus2010
Author(s)
Mine, A., Takeda, A., Taniguchi, T., Taniguchi, H., Kaido, M., Mise, K., Okuno, T.
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Journal Title
J.Virol.
Volume: 84
Pages: 6070-6081
Peer Reviewed
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[Journal Article] Interactions between p27 and p88 replicase proteins of Red clover necrotic mosaic virus play an essential role in viral RNA replication and suppression of RNA silencing via the 480-kDa viral replicase complex assembly2010
Author(s)
Mine, A., Hyodo, K., Takeda, A., Kaido, M., Mise, K., Okuno, T.
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Journal Title
Virology
Volume: 407
Pages: 213-224
Peer Reviewed
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[Journal Article] Template Recognition Mechanisms by Replicase Proteins Differ between Bipartite Positive-Strand Genomic RNAs of a Plant Virus2010
Author(s)
Iwakawa, H., Mine, A., Hyodo, K., An, M., Kaido, M., Mise, K., Okuno, T.
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Journal Title
J.Virol.
Volume: 85
Pages: 497-509
Peer Reviewed
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[Presentation] RNA Binding activity of Red clover necrotic mosaic virus replicase protein p27 plays important roles in the early replication steps of viral genomic RNA22010
Author(s)
Hyodo, K., Mine, A., Iwakawa, H., An, M., Kaido, M., Mise, K., Okuno, T.
Organizer
American Society for Virology 29^<th> Annual Meeting
Place of Presentation
Bozeman, Montana, USA
Year and Date
2010-07-18
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[Presentation] Analysis of long-distance RNA-RNA interaction required for an efficient-1 ribosomal frameshifting in red clover necrotic mosaic virus RNA12010
Author(s)
Tajima, Y., Iwakawa, H., Kaido, M., Mise, K., Okuno, T.
Organizer
American Society for Virology 29^<th> Annual Meeting
Place of Presentation
Bozeman, Montana, USA
Year and Date
2010-07-18
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