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2011 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子改変マウスを利用した損傷乗り越え型DNAポリメラーゼの機能解析

Research Project

Project/Area Number 22249005
Research InstitutionGakushuin University

Principal Investigator

花岡 文雄  学習院大学, 理学部, 教授 (50012670)

KeywordsDNA損傷トレランス / 損傷乗り越え複製 / TLSポリメラーゼ / DNAポリメラーゼ・イータ / REV1 / 紫外線感受性 / 突然変異
Research Abstract

研究代表者は、DNA損傷トレランスにおける複数の損傷乗り越え型DNAポリメラーゼ(TLSポリメラーゼ)の機能を明らかにするために、TLSポリメラーゼ遺伝子の改変マウスを利用し、以下の研究を進めた。
(1) PolηとREV1との相互作用の意義について:REV1はPolη、Polι、PolκなどのYファミリーポリメラーゼやBファミリーポリメラーゼの一つではあるが同じくTLS活性を持つPolζとも相互作用する。これらのタンパク質間相互作用の生理的意義を知るために、ポリメラーゼ活性あるいはREV1との相互作用活性を欠損したマウスPolηが細胞の紫外線感受性に与える影響を解析した。Polη、Polι、Polκの単独、二重あるいは三重ノックアウトマウス由来繊維芽細胞(MEF)に、REV1との相互作用部位あるいは触媒活性部位に変異を有するマウスPolηを発現させる実験系を構築し、紫外線感受性と突然変異の誘発率を調べた。その結果、PolηがTLSを出来ない場合、REV1というもう一つ別のTLSポリメラーゼを介してPolκが紫外線損傷を誤りがちに乗り越える経路の存在が示唆された。
(2) PolζとREV1との相互作用の生理的な意義について:(1)に述べたように、PolζもREV1と相互作用する。ベンゾピレンを特定のグアニンに付加させたプラスミド(BPDE-dG)をMEFに導入させる系を用いて、PolζとREV1との相互作用の生理的な意義を調べた。野生型MEFでは、BPDE-dG のTLSは効率よく起きるが、GからTへのトランスバージョンが高頻度で起きた。REV1をノックアウトすると、TLSの効率も、GからTへのトランスバージョンも低下した。Polη、Polι、Polκの三重ノックアウトMEFを用いた実験から、上記の変異にはPolζとREV1との相互作用が重要であることが分かった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

TLSポリメラーゼ遺伝子の改変マウスが得られ、そこからのMEFも出揃ってきて、ようやく順調に実験が進められるようになってきた。紫外線感受性の測定や突然変異率の測定などは軌道に乗っているので、スムーズにデータの取得が出来ている。

Strategy for Future Research Activity

これまで主として細胞レベルで明らかとなったことを踏まえて、現象をさらに掘り下げて分子レベルで理解できるようにしていきたい。一方、各種ノックアウトマウスを用いた個体レベルでの研究も展開していきたい。

  • Research Products

    (10 results)

All 2012 2011

All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 6 results) Presentation (4 results) (of which Invited: 4 results)

  • [Journal Article] The vital role of polymerase ζ and REV1 in mutagenic, but not correct, DNA synthesis across benzo[a]pyrene-dG and recruitment of polymerase ζ by REV1 to replication-stalled site.2012

    • Author(s)
      Hashimoto K
    • Journal Title

      J Biol Chem

      Volume: 287 Pages: 9613-9622

    • DOI

      10.1074/jbc.M111.331728

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Stalled Polη at its cognate substrate initiates an alternative translesion synthesis pathway via interaction with REV1.2012

    • Author(s)
      Ito W
    • Journal Title

      Genes Cells

      Volume: 17 Pages: 98-108

    • DOI

      10.1111/j.1365-2443.2011.01576.x

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Analysis of mice deficient in both REV1 catalytic activity and POLH reveals an unexpected role for POLH in the generation of C to G and G to C transversions during Ig gene hypermutation.2012

    • Author(s)
      Kano C
    • Journal Title

      Int Immunol

      Volume: 24 Pages: 169-174

    • DOI

      10.1093/intimm/dxr109

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] The molecular basis of CRL4DDB2/CSA ubiquitin ligase architecture, targeting, and activation2011

    • Author(s)
      Fischer, E. S., Scrima, A., Böhm, K., Matsumoto, S., Lingaraju, G. M., Faty, M., Yasuda, T., Cavadini, S., Wakasugi, M., Hanaoka, F., Iwai, S., Sugasawa, K., and Thomä, N. H
    • Journal Title

      Cell

      Volume: 147 Pages: 1024-1039

    • DOI

      10.1016/j.cell.2011.10.035

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] NBS1 recruits RAD18 via a RAD6-like domain and regulates Pol η-dependent translesion DNA synthesis.2011

    • Author(s)
      Yanagihara H
    • Journal Title

      Mol Cell

      Volume: 43 Pages: 788-797

    • DOI

      10.1016/j.molcel.2011.07.026

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Molecular chaperone Hsp90 regulates REV1-mediated mutagenesis.2011

    • Author(s)
      Pozo FM
    • Journal Title

      Mol Cell Biol

      Volume: 31 Pages: 3396-3409

    • DOI

      10.1128/MCB.05117-11

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Biochemical properties and structure of human DNA polymerase &eta, xeroderma pigmentosum variant-responsible gene product2011

    • Author(s)
      Hanaoka, F.
    • Organizer
      GDRI France Japan Conference
    • Place of Presentation
      Montpellier, France
    • Year and Date
      20111122-20111125
    • Invited
  • [Presentation] DNA修復研究における生化学的アプローチ2011

    • Author(s)
      花岡文雄
    • Organizer
      第84回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      国立京都国際会議場
    • Year and Date
      20110921-20110924
    • Invited
  • [Presentation] Biochemical properties and structure of human DNA polymerase η.2011

    • Author(s)
      Hanaoka, F.
    • Organizer
      6th UK-Japan Cell Cycle Workshop
    • Place of Presentation
      Lake Windermere, UK
    • Year and Date
      20110410-20110414
    • Invited
  • [Presentation] DNA修復と疾患:色素性乾皮症を中心に2011

    • Author(s)
      花岡文雄
    • Organizer
      第28回日本医学会総会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20110408-20110410
    • Invited

URL: 

Published: 2014-07-24  

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