2012 Fiscal Year Annual Research Report
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22300322
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Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
Principal Investigator |
弓場 俊輔 独立行政法人産業技術総合研究所, 健康工学研究部門, 研究グループ長 (40263248)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
出口 友則 独立行政法人産業技術総合研究所, 健康工学研究部門, 主任研究員 (30415715)
川崎 隆史 独立行政法人産業技術総合研究所, 健康工学研究部門, 主任研究員 (60356839)
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Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2013-03-31
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Keywords | 発癌 / メダカ |
Research Abstract |
まず、レーザ照射の標的とする膵臓組織を可視化するために、PTF1、PDX1、Nestin,insulinのメダカホモログをクローニングし、膵臓での発現を確認した。そこで、それぞれのプロモーター領域に蛍光タンパク質の遺伝子を繋いだコンストラクトを遺伝子導入したトランスジェニック(TG)メダカを作出したところ、P(insulin-2kb)-EGFPとP(Nestin-2kbp)-mOrangeを遺伝子導入した系統で膵臓特異的に蛍光タンパク質の発現を確認した。P(insulin-2kb)-EGFP TGメダカは2系統、P(Nestin-2kbp)-mOrange TGメダカは1系統の樹立に成功した。一方、がん組織への血管浸潤を可視化するため、血管可視化TG系統の樹立に関しては、メダカFLT1、EFNB2、EPHB4を含むメダカBACクローンを精製し、cDNA部分を蛍光タンパク質の遺伝子配列に置換した。このBACをメダカ受精卵に導入したところ、血管での発現は認められなかった。そこで、fli1で同様にBAC TG系統の作製を試みたところ、血管での蛍光タンパク質の発現が確認できた。赤外レーザにより発癌させるTG系統樹立に関しては、①ヒートショックプロモーター制御下でCreを発現する系統と②Cre発現によって、構成的プロモーター制御下で癌遺伝子が誘導される系統が必要であるが、①に関しては他の研究機関から入手予定で、②に関しては、現在、メダカβアクチンプロモーターの下流にloxPの2箇所およびそれらに挟まれた転写停止配列(STOP)からなるfloxed STOPカセット、さらにその下流にGFP-活性化Kras(KRasG12V)、SV40 largeT抗原を繋いだベクターも構築し、これを導入したTG(floxed STOP)系統も作製中である。
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Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Transgenic medaka fish which mimic the endogenous expression of neuronal kinesin, KIF5A.2012
Author(s)
Kawasaki T, Kurauchi K, Higashihata A, Deguchi T, Ishikawa Y, Yamauchi M, Sasanuma M, Hori H, Tsutsumi M, Wakamatsu Y, Yuba S, Kinoshita M.
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Journal Title
Brain Res.
Volume: 1480
Pages: 12-21
Peer Reviewed
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[Presentation] Lymphatic Development of medaka, Oryzias latipes.
Author(s)
Deguchi, T., Kawasaki, T., Yuba, S., Isogai, S., Shimoda, H., Nonaka, S., Hajiura-Kobayashi, H.
Organizer
日本動物学会第83回大会
Place of Presentation
大阪
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[Presentation] Medaka is a new animal model to study lymphatic development and regeneration.
Author(s)
Deguchi, T., Kawasaki, T., Yuba, S., Isogai, S., Shimoda, H., Nonaka, S., Hajiura-Kobayashi, H.
Organizer
18th Japanese Medaka and Zebrafish Meeting
Place of Presentation
京都
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[Presentation] Application of infrared laser to the zebrafish vascular system: gene inductio n, tracing, and ablation of single endothelial cells.
Author(s)
Kimura, E., Deguchi, T., Kamei, Y., Shoji, W., Yuba, S., Hitomi, J.
Organizer
第35回分子生物学会年会
Place of Presentation
博多