2010 Fiscal Year Annual Research Report
微細藻類が生産する核内受容体活性化物質の水生動物への影響
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22310020
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
彼谷 邦光 筑波大学, 大学院・生命環境科学研究科, 特任教授 (40124341)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
白石 不二雄 国立環境研究所, 環境リスク研究センター, 研究室長 (30113476)
佐野 友春 国立環境研究所, 環境計測研究センター, 主任研究員 (10178808)
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| Keywords | 7-hydroxy retinoic acid / RAR / Two-hybrid assay / cyanobacteria / Microcysits / spirulina / ATLA / UV-A |
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| Research Abstract |
研究の目的:富栄養化した湖沼で大量発生する微細藻類が水生動物細胞のレチノイド系やステロイド系の核内受容体を活性化する物質(リガンド)を多量に生産していることを見出した。本研究では微細藻類の生産する核内受容体活性化物質の化学構造の解明とそれらの水生動物へめ影響を明らかにすることを目的とする。初年度である本年は藍藻類に多く見られるRetinoic Acid Receptor(RAR)の活性化物質の化学構造を決めることを目標とした。研究方法:RAR活性の強い藍藻類を調査し、活性が強く、しかも増殖し易い藍藻をNIES株から選抜した。培養にはMicrocystis aeruginosa NIES-44およびSpirulina sp.(TU-3)を用いた。半年間の培養で約500gの乾燥藻体を得た。酵母にRAR遺伝子と活性化因子およびb-ガラクトシダーゼの遺伝子を組み込んだアッセイ系を用いて活性画分を分画した。分画はフロリジルおよびケイ酸カラムで分画し、逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーで活性本体を得た。検出はPDA(350nm)で行った。結果:活性本体は逆相カラムで4つのピークとして現れた。最大活性ピークを分取りし、再クロマトを行うと、最初と同じ4つのピークになったことから、活性本体は4種類の異性体が平衡関係にあると考えられた。本化成本体のTOFMSデータから本化合物はC20H2803と確定した。また、水素添加した場合はC20H3803であった。これらのLC-MS/MSデータから本活性物質は7-hydroxy retinoic acidであると推定された。本物質はRARの本来の活性化物質であるall trans retinoic acid(ATRA)よりUV-Aに対して安定であった。
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