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2010 Fiscal Year Annual Research Report

ガレクチン3の細胞表面への結合による正常細胞の増殖抑制の分子メカニズム

Research Project

Project/Area Number 22370048
Research InstitutionNagaoka University of Technology

Principal Investigator

古川 清  長岡技術科学大学, 工学部, 教授 (10190133)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 佐藤 武史  長岡技術科学大学, 工学部, 助教 (30291131)
Keywordsガレクチン-3 / 細胞表面糖鎖 / 細胞増殖抑制 / 細胞内情報 / 創傷治癒
Research Abstract

ガレクチン-3が密度依存的に細胞外へ分泌されるメカニズムの解明
1)SNAP-ガレクチン-3の構築:細胞を固定し細胞外へ分泌されたガレクチン-3を抗体で検出すると、固定法により細胞内へ抗体が侵入し細胞膜直下のガレクチン-3を検出し、細胞表面のガレクチン-3と区別できなかった。
そこでSNAP-tagをもつガレクチン-3を構築し、これを発現する安定細胞株を取得し、細胞外に分泌されたSNAP-ガレクチン-3を膜透過性のない蛍光標識をしたSNAPの基質と結合させ解析すると、密度70%の細胞でガレクチン-3は検出され始めた。
2)GFP-ガレクチン-3の局在性:GFP-ガレクチン-3を発現する安定細胞株を取得しその蛍光を観察すると、密度の増加とともに細胞膜直下に顆粒状の構造が観察された。ガレクチン-3はエクソゾーム(外分泌顆粒)を形成して分泌されることから、この顆粒がエクソゾームであることを証明するため、そのマーカーであるRab4に対する抗体で染色した。その結果、ガレクチン-3の顆粒近辺にRab4の抗体が反応したが、さらなる解析が必要である。
3)エクスクリーションのメカニズムの解明:エクソゾームの形成はカルシウムイオンで促進されるので、エクソゾームが見られない密度10%の細胞をカルシウム・イオノフォアA23187で処理をすると、GFP-ガレクチン-3が顆粒状に集積している像が観察された。細胞内カルシウム濃度は密度依存的に亢進するので、現在どの密度で細胞内カルシウム濃度が増大するかをカルシウム・インジケーターFluo-4AMを用いて解析している。
4)カメレオン・タンパク質を発現させた細胞の作製:カメレオン・タンパク質はカルシウムと結合すると、その蛍光をCFPからYFPヘシフトする。この特性を用いて、カメレオン発現細胞でどのような刺激(細胞同士の接着など)でカルシウムが流入するかを特定する予定である。

  • Research Products

    (14 results)

All 2010 Other

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (10 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Involvement of β-1, 4-galactosyltransferase V in lactosylceramide biosyn-thesis.2010

    • Author(s)
      T.Kumagai, et al.
    • Journal Title

      Glycoconjugate Journal

      Volume: 27 Pages: 685-695

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Comparative proteomics analysis of differentially expressed proteins in soybean cell wall during flooding stress.2010

    • Author(s)
      S.Komatsu, et al.
    • Journal Title

      Amino Acids

      Volume: 39 Pages: 1435-1449

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Enzymatic synthesis of lavto-N-difucosylhexaose I which binds to Helico-bacter2010

    • Author(s)
      T.Miyazaki, et al.
    • Journal Title

      Methods in Enzymology

      Volume: 48 Pages: 511-524

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Functions and Application of the sugar chains attached to proteins and lipids.2010

    • Author(s)
      K.Furukawa
    • Organizer
      Churaloncon Univ. Symposium
    • Place of Presentation
      Bangkock/Thailand
    • Year and Date
      2010-12-22
  • [Presentation] Mice lacking β-1, 4-galactosyltransferase V exhibit it is a lactosylcer-amide svnthase.2010

    • Author(s)
      T Kumagai, et al.
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会第83回日本生化学学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2010-12-10
  • [Presentation] ガラクトース結合タンパク質をコードするプラナリア遺伝子の単離の試み2010

    • Author(s)
      小出知史, 他
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会第83回日本生化学学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2010-12-09
  • [Presentation] マウス繊維芽細胞における細胞周期依存的なタンパク質の糖鎖修飾の解析2010

    • Author(s)
      許斐雅裕、古川清
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会第83回日本生化学学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2010-12-09
  • [Presentation] マンノース結合タンパク質をコードするプラナリア遺伝子の単離2010

    • Author(s)
      和田拓也, 他
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会第83回日本生化学学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2010-12-09
  • [Presentation] 形質転換したマウス繊維芽細胞SV-T2細胞におけるVCAM-1による足場非依存的な増殖の抑制メカニズム2010

    • Author(s)
      田所友美、山本明史、孫月、古川清
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会第83回日本生化学学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2010-12-08
  • [Presentation] 転写因子Splをノックダウンしたヒト肺癌細胞におけるE-カドヘリン/β-カテニン複合体の解析2010

    • Author(s)
      佐藤武史、肩本光大、古川清
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会第83回日本生化学学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2010-12-08
  • [Presentation] Biochemical studies of glycoproteins and glycolipids from β-1, 4-galac-tosvltransferase V-knockout mouse embryos.2010

    • Author(s)
      T.Kumagai, et al.
    • Organizer
      25th International Carbohydrate Symposium
    • Place of Presentation
      Makuhari, Japan
    • Year and Date
      2010-08-05
  • [Presentation] A study on the synthesis of functional glucomannan preventing H. pylori infection.2010

    • Author(s)
      T.Miyazaki, et al.
    • Organizer
      25th International Carbohydrate Symposium
    • Place of Presentation
      Makuhari, Japan
    • Year and Date
      2010-08-03
  • [Presentation] Enzymatic synthesis of lacto-N-difucohexaose using glycosidase and glycosyltransferases.2010

    • Author(s)
      K.Ajisaka, et al.
    • Organizer
      25th International Carbohydrate Symposium
    • Place of Presentation
      Makuhari, Japan
    • Year and Date
      2010-08-02
  • [Remarks]

    • URL

      http://bio.nagaokautacjp/~furukawa-l/

URL: 

Published: 2012-07-19  

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