2012 Fiscal Year Annual Research Report
発生・分化過程における哺乳類染色体の普遍的構築原理とその意義
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22380188
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
奥村 克純 三重大学, 生物資源学研究科, 教授 (30177183)
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| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | エピジェネティクス / クロマチン構造 / DNAメチル化 / DNA複製 / DNA損傷 |
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| Research Abstract |
本年度の実施計画に沿って研究を進め以下の成果を挙げた。
(1) 複製フォークの進行を指標として胚発生に伴う複製ドメインの形成過程を明らかにするためにゼブラフィッシュの発生系を導入し，卵から発生期にある細胞に対してハロゲン化ヌクレオシドを取込ませ，DNAファイバー上に複製フォークを可視化することに初めて成功した。
(2) DNAメチル化レベルの低下により誘導されるDNA損傷遺伝子領域を網羅的に同定し，その領域の特徴を明らかにした。すなわち，クロマチン免疫沈降 (ChIP) 法によりDNA損傷マーカーであるγ-H2AX蓄積領域を濃縮し，メチル化CpGの豊富な遺伝子領域の定量をリアルタイムPCRにより行い，それらの領域にDNA損傷が誘導されていることを示した。さらに，ChIPにより回収されたγ-H2AX蓄積領域を次世代シークエンサーにより網羅的に配列を解読するChIP-sequence解析を行った結果，損傷領域として同定された遺伝子領域の多くにCpG islandが近接していた。
(3) 損傷について提案したモデルの検証として，5-aza-dC処理後，少なくとも一度はS期を通過させた細胞をその次のG1期に同調し，ChIP-リアルタイムPCR法によりUHRF1が結合している遺伝子領域を定量解析して，5-aza-dC処理により生じたヘミメチル化DNA領域にUHRF1が結合したままになるモデルを支持する結果を得た。ヘミメチル化DNAの生成についてもヘアピンバイサルファイト法で確認した。
(4) 最終年度であり，成果のとりまとめを行った。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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