2010 Fiscal Year Annual Research Report
酸化ステロールエステルによる小胞体ストレスの誘導機構の解明とその病態における意義
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22390187
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| Research Institution | Jichi Medical University |
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Principal Investigator |
石橋 俊 自治医科大学, 医学部, 教授 (90212919)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大須賀 淳一 自治医科大学, 医学部, 講師 (10334400)
野牛 宏晃 自治医科大学, 医学部, 講師 (60348018)
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| Keywords | コレステロール / マクロファージ / ERストレス / オキシステロール / NCEH1 / アポトーシス / ACAT |
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| Research Abstract |
A)Nceh1の基質特異性に関して、酸化ステロールエステルに対する水解活性を比較した。[^<14>C]標識オレイン酸を25水酸化コレステロールの3位の水酸基にエステル結合し、25水酸化コレステロールエステルを作製した。標識組み換えアデノウイルスを用いてNceh1、Lipe、Ces1をHEK293細胞に過剰発現し、細胞lysateを酵素に用いて、25水酸化コレステロールエステルとコレステロールエステルの水解活性を比較した。Lipe>>Nceh1の順に双方の基質を水解活性を示したが、Ces1には酵素活性は検出されなかった。
マウス腹腔マクロファージ(MPM)におけるNceh1の発現調節に関しては、LPSによる抑制、フィブレートの一種による誘導を確認した。
B)Nceh1欠損マウス由来の細胞を用いた実験:i)Nceh1欠損マウスからのMEFの樹立:Nceh1欠損マウスからMEFを樹立し、25水酸化コレステロール添加によるアポトーシス惹起効果を野生型MEFと比較した。それぞれのMPMの場合と異なり、25水酸化コレステロール添加に対する感受性に有意差は認められなかった。MEFにおけるNceh1の発現を検討中である。ii)Nceh1欠損マウス由来MPMは野生型MPMに比較して、25水酸化コレステロールの添加によるERストレスマーカーCHOPの著明な増加を示した。しかし、添加後24時間ではMTTやTUNEL法で評価した細胞死には野生型との間に有意な差を検出出来ないでいる。至適条件を検討中である。
C)Nceh1/Acat1ダブル欠損マウスの樹立:Nceh1欠損マウスとACAT1欠損マウスを交配して、両酵素を欠損するダブルノックアウトマウスを作製した。
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