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2010 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト細胞遺伝子改変法BRCA1へテロ欠失細胞の作成と解析

Research Project

Project/Area Number 22500999
Research InstitutionAichi Medical University

Principal Investigator

小西 裕之  愛知医科大学, 医学部, 准教授 (20344335)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 細川 好孝  愛知医科大学, 医学部, 教授 (60229193)
シバスンダラン カルナン  愛知医科大学, 医学部, 助教 (30557096)
Keywordsヒト細胞遺伝子改変 / BRCA1
Research Abstract

前年度までに、2種類の非癌ヒト乳腺上皮細胞株(自然不死化細胞株MCF-10AおよびhTERT導入による不死化細胞株hTERT-IMEC)に対して遺伝子ターゲッティングを行い、それぞれ複数のBRCA1ヘテロ欠失クローンを樹立している。
平成22年度は、まずBRCA1ヘテロ欠失クローンがDNA二重鎖切断に対する相同組換え修復能の不全を示すか否かを検討した。GFPタンパク質の発現量を指標としてDNA相同組換えを定量しうるベクターをBRCA1ヘテロ欠失クローン群と対照クローン群(親株など)に安定導入し、それぞれのクローンから複数の単一細胞由来サブクローンを樹立した。各サブクローンにI-SceIによるDNA二重鎖切断を導入し、GFPシグナルを測定したところ、BRCA1ヘテロ欠失クローンに有意な相同組換え能の低下を認めた。続いて、BRCA1ヘテロ欠失に起因するDNA修復異常がゲノムのコピー数異常を誘導するか否かを検討するため、上記の両細胞群をSNPアレイで解析した。その結果、BRCA1ヘテロ欠失クローンのゲノム各所に散発的なコピー数低下を認めた。一方、DNA修復と並んでBRCA1の重大な関与が示唆されている細胞周期G2期チェックポイントに関しては、照射後早期・後期のいずれにおいてもBRCA1のハプロタイプによる有意な違いは認められなかった。DNA障害性薬剤への感受性に関しては、BRCA1ヘテロ欠失クローンのアドリアマイシンに対する高感受性を認めた一方で、PARP阻害剤に対する感受性はBRCA1ヘテロ欠失クローンと対照細胞の間で有意差を認めなかった。これらの研究結果は、遺伝性乳癌の発生におけるBRCA1ヘテロ欠失の役割を解明する上で重要な糸口になると考えられた。

  • Research Products

    (7 results)

All 2011 2010

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (4 results)

  • [Journal Article] PIK3CA mutations and EGFR overexpression predict for lithium sensitivity in human breast epithelial cells2011

    • Author(s)
      Higgins MJ
    • Journal Title

      Cancer Biology & Therapy

      Volume: 11巻 Pages: 358-367

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Knock in of the AKT1 E17K mutation in human breast epithelial cells does not recapitulate oncogenic PIK3CA mutations2010

    • Author(s)
      Lauring J
    • Journal Title

      Oncogene

      Volume: 29巻 Pages: 2337-2345

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Novel Metastasis-Related Gene CIM Functions in the Regulation of Multiple Cellular Stress-Response Pathways2010

    • Author(s)
      Yanagisawa K
    • Journal Title

      Cancer Research

      Volume: 70巻 Pages: 9949-9958

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] A new protocol of somatic cell gene targeting in human cell lines and its application to breast cancer research2010

    • Author(s)
      Konishi H
    • Organizer
      The 15^<th> Japan-Korea Cancer Research Workshop
    • Place of Presentation
      Sheraton Incheon Hotel (Incheon, Korea)
    • Year and Date
      2010-12-22
  • [Presentation] ヒト培養細胞遺伝子改変の新しい技術を用いた癌関連遺伝子の機能解析2010

    • Author(s)
      小西裕之
    • Organizer
      第83回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      神戸国際展示場(兵庫県)
    • Year and Date
      2010-12-07
  • [Presentation] 細胞外ストレス応答を制御する新規肺がん転移関連遺伝子CIMの機能解析2010

    • Author(s)
      柳澤聖
    • Organizer
      第69回日本癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      大阪国際会館(大阪府)
    • Year and Date
      2010-09-23
  • [Presentation] ヒト培養細胞遺伝子改変の新技術を用いた癌関連遺伝子の機能解析2010

    • Author(s)
      小西裕之
    • Organizer
      第69回日本癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      大阪国際会館(大阪府)
    • Year and Date
      2010-09-22

URL: 

Published: 2013-06-26  

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