2011 Fiscal Year Annual Research Report
ミトコンドリアRNAポリメラーゼ転写反応における酸化DNA損傷の影響
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22510060
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
倉岡 功 大阪大学, 基礎工学研究科, 准教授 (60335396)
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| Keywords | ミトコンドリア / RNAポリメラーゼ / 酸化DNA損傷 |
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| Research Abstract |
DNAは遺伝情報を担う重要な物質であり、生命が正常に営まれるためには安定にDNAを維持しなければならない。しかしDNAは放射線、紫外線、化学物質などの外的要因、および細胞の代謝過程で発生する活性酸素などの内的要因により絶えず損傷を受けている。これらのDNA損傷は、細胞死や突然変異を誘発し、ひいては老化・がん化等の原因になる。
細胞内のエネルギーを生産するミトコンドリアにおいて、その大量な酸素消費から多くの活性酸素が生じ、ミトコンドリアDNAに多くの酸化DNA損傷を導くことが容易に想像できる。また事実その酸化DNA損傷の存在が証明されている。細胞はこの損傷の多いミトコンドリアにおいてどのように転写反応を進めるのだろうか?またどのように損傷を修復し機能を回復させるのだろうか?それらを調べるために、ミトコンドリアのRNAポリメラーゼの転写伸長反応が損傷によってどのような挙動を示すか?精製したミトコンドリアRNAポリメラーゼおよび損傷DNAオリゴを用いて生化学的手法によって解析した。
酸化DNA損傷8-オキソグアニン、チミングリコール、または塩基脱離部位を含むDNAテンプレートに対して、プライマーRNAを対形成させ複合体を形成した後、ミトコンドリアRNAポリメラーゼによりRNA合成を観察、その結果、ミトコンドリアRNAポリメラーゼは、8-オキソグアニン、チミングリコールを乗り越えることがわかった。一方塩基脱離部位においては、ミトコンドリアRNAポリメラーゼの転写は停止していた。さらに、紫外線により生じるシクロブタンダイマーおよび6-4光産物を加えて試験したところ、転写の停止が観察された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
生化学的な研究は一旦終了し、細胞学的な知見を加えるに至る。ほほ予定通りである。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在、細胞学的解析を含めて、それらの知見を加え論文として投稿する予定である。
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[Journal Article] Identification of a small molecule PCNA inhibitor that disrupts interactions with PIP-Box proteins and inhibits DNA replication2012
Author(s)
Punchihewa C, Inoue A, Hishiki A, Fujikawa Y, Connelly M, Evison B, Shao Y, Heath R, Kuraoka I, Rodrigues P, Hashimoto H, Kawanishi M, Sato M, Yagi T, Fujii N
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Journal Title
J Biol Chem
Volume: (印刷中)
Peer Reviewed
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