2011 Fiscal Year Annual Research Report

ＥＳ細胞におけるＥＲａｓ遺伝子のＲｈｏ／ＲＯＣＫ経路を介したアポトーシスへの関与

Research Project

Project/Area Number	22510212
Research Institution	Akita University
Principal Investigator	池田たま子秋田大学, 学内共同利用施設等, 助教 (10406035)
Keywords	ES細胞 / ERas遺伝子 / Rock阻害薬 / アポトーシス
Research Abstract	霊長類iPS/ES 細胞は、マウスES 細胞の様に、単細胞継代培養を行うと、殆どの細胞がアポトーシス (継代時の細胞死)を起こす性質がある。その為、臨床応用に向けた、ヒトiPS 細胞の「遺伝子改変」や「株化細胞樹立」の大きな障害となっている。我々は、霊長類とマウスES 細胞の違いに着目した結果、ERas 遺伝子発現が異なることを見つけた。近年、ヒトES 細胞にROCK 阻害薬を添加することにより、単細胞継代時のアポトーシスを抑制し、細胞増殖を促進できることが報告された。しかし、ROCK 阻害薬の霊長類ES 細胞への作用機序については、不明な点が多い。我々は、ERas 遺伝子は、ROCK 阻害剤の作用機序を担う一因子である可能性が高いと考えた。本研究では、マウス・霊長類E S 細胞におけるE R a s 遺伝子の「R h o / R O C K 経路」を介した「アポトーシス」への関与を明らかにしたい。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 昨年度は、サルERas遺伝子発現を確認し、カニクイザルES細胞および体細胞でのERas遺伝子発現が、僅かに発現していた事を発見した。また、カニクイザルERas遺伝子の配列を調べたところ、シュードジーン化していた事もわかった。本年度は、昨年得られたサルERas遺伝子配列から、カニクイザルERas発現ベクターを作製した。そこで、作製したカニクイザルERas遺伝子、マウスERas遺伝子、ヒトERas遺伝子の機能の比較を実施する事とした。細胞内局在：カニクイザル・マウス・ヒトERas発現蛋白は、細胞膜裏に局在する事が判った。次に、細胞増殖能：各ERas遺伝子導入細胞の増殖能は、遺伝子発現がない細胞と比らべ、細胞増殖能があることが判った。また、マウス・ヒト・サルERas遺伝子の細胞増殖機能を比較したが、増殖能に差は認められなかった。増殖カーブ・細胞増殖を経時的に比較した処、アポトーシス抑制している所見が認められた。
Strategy for Future Research Activity	本年度は、昨年得られた結果を元に、アポトーシス抑制機構とRhoシグナル伝達経路の関与について、詳細に解析する予定である。