2012 Fiscal Year Annual Research Report
高純度ウイルス粒子の試験管内合成とナノテクノロジーへの応用
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22560774
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| Research Institution | University of Hyogo |
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Principal Investigator |
今高 寛晃 兵庫県立大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (50201942)
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| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | タンパク質合成 / ウイルス / セルフリーシステム / 脳心筋炎ウイルス / 試験管内合成 / ドラッグデリバリー / Ｅ型肝炎ウイルス / バイオイメージング |
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| Research Abstract |
最終年度である２４年度はウイルス殻の加工に力を注いだ。脳心筋ウイルス（ＥＭＣＶ）のカプシドタンパク１Ｄにあるループ１は粒子の外側に突き出ていることがわかっているため、その部位にＦＬＡＧ配列を挿入した。カプシドＬ－１Ｄ（ＦＬＡＧ）をヒト細胞抽出液由来試験管内タンパク質合成系で発現させ、粒子を形成させた。そしてＦＬＡＧカラムで精製し、透過型電子顕微鏡で形態を観察したところ直径１０ｎｍ程度の非常に小さな粒子が形成されていた。野生型のＥＭＣＶは直径３０ｎｍであるため、正常な形をとっているとは言い難かった。そこで野生型のＬ－１ＤとＬ－１Ｄ（ＦＬＡＧ）を７：３の割合で発現させ、ところどころにＦＬＡＧが突き出るように工夫した。そうすると大きさも３０ｎｍ程度の粒子ができた。そこでＦＬＡＧ配列の近傍にＲＧＤ配列を挿入した。ＲＧＤ配列は腫瘍細胞で多く発現しているインテグリンに結合するため、腫瘍細胞をターゲテイングすることができる。現在粒子を形成させているところである。
一方、Ｅ型肝炎ウイルスのカプシドタンパクＯＲＦ２を利用するためにＯＲＦ２を大腸菌で発現させ、カルシウム存在下でインキュベートすると粒子が形成された。この粒子は透過型電子顕微鏡観察で直径３０ｎｍの典型的なＥ型肝炎ウイルス様形状を呈していることがわかった。ＯＲＦ２のＮ末はカプセルの内側、Ｃ末はカプセルの外側に向いている事がわかっている。そこでＣ末にＲＧＤ配列を入れて粒子を形成させた。そして、できあがった粒子をメラノーマ細胞とインキュベートすると効率良く細胞に取り込まれることがわかった。カプセルの内側に量子ドットを挿入するため、市販の量子ドットを粒子形成の際に共存させた。すると量子ドットを内包する粒子が２－３割の確率で形成された。これはＮ末に存在しているヒスタグと重金属との相互作用に拠るものと考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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