2010 Fiscal Year Annual Research Report
バクテリア型色素体RNA結合因子による葉緑体分化制御機構の解明
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22570045
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
楠見 健介 九州大学, 大学院・理学研究院, 助教 (00304725)
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| Keywords | 葉緑体 / RNA結合タンパク質 / リボソームRNA / rrnオペロン / 転写制御 / イネ / シロイヌナズナ / 色素体 |
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| Research Abstract |
(1)大腸菌のリボソームタンパク質情報を基に、NUS1のバクテリアオルソログであるNusBと相互作用する因子の葉緑体オルソログを推定しcpNUSEと命名した。cpNUSEの組換え蛋白質を合成しそれを抗原とした抗体を作成した。これらの因子はリボゾームタンパク質と相互作用し、プレrRNAの認識特異性と結合活性を高める可能性がある。また、これらはP-NIJSに含まれるタンパク質の同定に用いる。(2)rrnオペロンの5'隣接配列に対応するRNAプローブを合成し、NUS1との結合を調べた。すでにNUS1結合領域として、既知の転写開始点を含む250bpの範囲をin vitroタンパク質-RNAゲルシフト解析で同定しているが、さらに相互にオーバーラップする約60bpの9つの領域に分けて、組換えNUS1タンパク質とのin vitroでの結合活性を調べた。シロイヌナズナNUS1とrrn配列を用いて調べたところ、転写開始点PC付近の配列に対応するRNAに最も結合活性が高く、その他の領域では低いことがわかった。また、NUS1と同様にNUS機能ドメインを持つNUS2タンパク質についても、組換え蛋白質を合成し同様の実験を行ったが、NUS1に比べ結合パターン、活性共に異なる結果が得られたため、rrnオペロンに関してはNUS1とは異なる機能を持つと推定される。これらの結果はイネのデータと比較したうえで、NUS1の機能推定の基礎データとする。(3)NUS1タンパク質が他の葉緑体プレRNAに結合する可能性を探索するため、複数の遺伝子の5'UTR領域を対象としてin vitroゲルシフトアッセイにより結合活性を調べ、clpPおよびrbcLの5'UTR領域に結合することが分かった。
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