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2012 Fiscal Year Annual Research Report

トランスポゾン様遺伝子の進化的多様化と機能性非翻訳RNA解析

Research Project

Project/Area Number 22580005
Research InstitutionTottori University

Principal Investigator

富田 因則  鳥取大学, 農学部, 准教授 (70207611)

Project Period (FY) 2010-04-01 – 2013-03-31
Keywordsムギ類 / トランスポゾン / RNA / 構造変異 / 遺伝子発現 / クラスター
Research Abstract

RevolverトランスポゾンのcDNAライブラリーの塩基配列を決定した結果、5クラスに分類され、第1エキソンの構造が全く異なる完全長cDNAが見いだされた。cDNAの5’末端から約100 nt下流にプライマーを合成して全RNAとアニーリングさせた後,逆転写酵素でプライマー伸長反応を行った結果、転写開始点はcDNAの5’末端に対応していた。5個のcDNAは、全長1597 bpで第2イントロン(1210 bp)、第3エキソン(301 bp)を持つが、その5’側に通常ない86 bpの配列を持っている。他方、4個のcDNAも、全長380 bpで上記の1597 bpのcDNAに対して第2イントロンを欠くものであり、多様なノンコーディングRNAが転写されていた。
一方、保存性の高い翻訳領域を持つcDNAをベクターpET32a(+)にSal I、Nco I消化で連結させて発現ベクターを作製し、大腸菌BL21(DE3)、BL21(DE3)PLysSに形質転換した。これを、シングルコロニーからA600=0.6になるまで培養し、1 mM IPTGを加えて融合タンパク質の発現を誘導した。LB培地ではBL21(DE3)PlysS菌の沈殿上に発現タンパク質が不溶化したゾル状物質が観察され、BL21(DE3)菌をTB培地で培養した場合に約20 kDaのタンパク質が10%SDS-PAGEで検出された。このcDNAプローブの染色体FISH法により、ドット状で点在するクラスターが1R短腕の中央介在部, 2R短腕の末端近傍の介在部と動原体付近の2箇所, 5R短腕の中央介在部と長腕動原体付近と中央介在部の3箇所に再現性高く検出された。この他, 6R短腕の中央介在部と長腕動原体付近の2箇所, 3R長腕動原体付近, 4R短腕中央介在部のシグナルも特徴的であり、Revolverコア遺伝子はクラスター状に存在していた。

Current Status of Research Progress
Reason

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

24年度が最終年度であるため、記入しない。

  • Research Products

    (4 results)

All 2013 2012

All Presentation (2 results) Book (2 results)

  • [Presentation] Divergent PCR products of Revolver transposon showing cluster-like chromosomal distribution.2013

    • Author(s)
      Tomita, M., and Tanaka, E.
    • Organizer
      日本育種学会第123回講演会
    • Place of Presentation
      東京農業大学(東京)
    • Year and Date
      20130327-20130328
  • [Presentation] Cluster-like chromosomal distribution of Revolver transposon and its transcription initiation site in Secale cereale.2012

    • Author(s)
      Tomita, M., and Kanzaki, T.
    • Organizer
      第35回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      マリンメッセ福岡(福岡)
    • Year and Date
      20121211-20121214
  • [Book] 植物のゲノム育種.”新バイオの扉 生物工学の広がり“ (高木正道・池田友久 編)2013

    • Author(s)
      富田因則
    • Total Pages
      312
    • Publisher
      裳華房
  • [Book] Recent patent on Revolver-2: a novel transposon-like gene useful for chromosome tags of rye. In New Developments in Chromatin Research (Eds. Neil M. Simpson and Valerie J. Stewart, ISBN 978-1-62081-816-9)2012

    • Author(s)
      Tomita, M.
    • Total Pages
      247 (pp.161-176)
    • Publisher
      Nova Science Publishers, New York

URL: 

Published: 2014-07-24  

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