2010 Fiscal Year Annual Research Report
トランスポゾンによる麹菌の多様性を生み出すストレス応答機構の解明
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22580096
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| Research Institution | 秋田県総合食品研究センター |
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Principal Investigator |
小笠原 博信 秋田県総合食品研究センター, 醸造試験場, 上席研究員 (50390901)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高橋 砂織 秋田県総合食品研究センター, 加工研究所, 所長 (10142184)
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| Keywords | トランスポゾン / 外来性遺伝子 / 多様性 / 麹菌 / mRNA |
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| Research Abstract |
麹菌の活性型DNAトランスポゾンCrawlerは、分生胞子における高濃度のCu^<2+>や高温などのストレス処理によって転移活性を発現する。このとき、Crawler-mRNAはスプライシングやpoly(A)付加を受けた不完全な分子種が減少しインタクトな全長mRNA比率が増加することが認められ、Crawlerの機能化(転移活性化)につながると推定される。そこで、本研究ではゲノムの多様化機構の解明を目的にトランスポゾンCrawlerをストレス条件下で活性化する外来性遺伝子のモデルとし、全mRNAのスプライシング変動を比較解析することにより、新たに機能化する外来性遺伝子の探索を行った。
【方法】Cu^<2+>ストレス処理後および対照区の分生胞子よりtotal RNAを抽出し、全cDNAシーケンシングを基にDOGANのアノテーションデータも加えたストレス応答cDNAブラウザーを構築した。アノテーションがなされていない領域を中心に、のCraler-mRNAと同様にストレス応答により、強いスプライシング阻害が認められるDNA配列を抽出し、Blast検索による解析を行った。
【結果】ChromosomelのSCOO9よりA. nigerのDNAトランスポゾンTanに相同性の高い配列やレトロトランスポゾンのgag様配列などが見出された。Tan1様配列は558アミノ酸からなるtransposaseをコードし、42bpの完全なTIRと2bp(TA)のTSD配列に囲まれた新規のDNAトランスポゾンであった。A. oryzaeゲノム内を検索したところ、7コピーの完全型、4コピーの変異型および約90コピーのdegenerate型が分布し、多コピーであることからCrawler様に転移活性化の可能性も示された。
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