エンド型植物細胞表層多糖加水分解酵素の構造機能相関の解明

2010 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 22580110
• Research Institution: National Agriculture and Food Research Organization
• Principal Investigator: 金子 哲 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構, 食品総合研究所食品バイオテクノロジー研究領域, 主任研究員 (90343821)
• Keywords: アラビノガラクタン-プロテイン / アラビノガラクタン / 糖加水分解酵素 / 結晶構造解析 / 構造機能相関 / エンド-β-1,6-ガラクタナーゼ / Streptomyces avemitilis

Research Abstract

本研究は(1)エンド-β-1,6-ガラクタナーゼの立体構造を解明し、(2)エンド-β-1,6-ガラクタナーゼの基質特異性のメカニズムを明らかにすることを目的とする。本研究では、Streptomyces avermitilis由来エンド-β-1,6-ガラクタナーゼとAspergillus flavus由来別種エンド-β-1,6-ガラクタナーゼと考えられる酵素を対象とし、糖加水分解酵素ファミリー5に分類されるエンド-β-1,6-ガラクタナーゼの基質特異性のメカニズムを解明し、同ファミリーに属するグルカナーゼ、マンナナーゼ、キシラナーゼなどの酵素との立体構造的な差異を解明する。
本年度は、Aspergillus flavus由来エンド-β-1,6-ガラクタナーゼ様遺伝子をPichia pastorisの系で発現させることに成功した。S.avermitilis由来エンド-β-1,6-ガラクタナーゼを大腸菌の系で、A.flavus由来別種エンド-β-1,6-ガラクタナーゼをP.pastorisの系で、それぞれセレノメチオニンを導入した組換え酵素の発現を試み、S.avermitilis由来エンド-β-1,6-ガラクタナーゼについてセレノメチオニン導入組換え酵素の発現に成功した。セレノメチオニンを導入したS.avermitilis由来エンド-β-1,6-ガラクタナーゼについて、結晶化条件の検討を試みた。