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2010 Fiscal Year Annual Research Report

植物葉緑体のマグネシウムイオン膜輸送チャネルファミリータンパク質の分子機能解析

Research Project

Project/Area Number 22580123
Research InstitutionKyoto Prefectural University

Principal Investigator

石嶌 純男  京都府立大学, 生命環境科学研究科, 准融授 (70184520)

Keywordsマグネシウムイオン / 膜輸送タンパク質 / 葉緑体 / リポソーム / シロイヌナズナ
Research Abstract

1 植物Mg^<2+>膜輸送タンパク質recombinant proteinの調製
シロイヌナズナArabidopsis thaliana 由来のCorAファミリータンパク質AtMRS2-1および11を大腸菌で発現し、精製した。AtMRS2-11は、大腸菌での発現量が低く、今後、分子シャペロン過剰発現大腸菌の使用等による、高発現系の開発が課題となる。
2 Mg^<2+>膜輸送タンパク質活性測定システムの構築
Recombinantタンパク質をリポソームに組み込み、外液にMg^<2+>を加えて一定時間インキュベーションしたのち、リポソーム内のMg含量を原子吸光分析法を用いて、また、遊離Mg^<2+>濃度を蛍光指示薬mag-fura-2を用いて測定した。リポソームに再構成したAtMRS2-10を用いて、Mg^<2+>膜輸送活性測定系を確立した。これにより、AtMRS2-10によるMg^<2+>の輸送反応は20秒以内に平衡に達し、また、AtMRS2-10によるMg^<2+>の輸送反応はAl^<3+>によって強く阻害されることを見出した。
3 Mg^<2+>要求性大腸菌Mg^<2+>膜輸送タンパク質遺伝子多重変異株の作成
corA、mgtA、yhiDの三つの遺伝子を欠失させたMg^<2+>要求性の大腸菌多重変異株を作成した。この変異株の生育には、外液に100mM Mg^<2+>が必要であり、今後、この三重変異大腸菌株は、植物のMg^<2+>膜輸送タンパク質を発現させることにより、膜輸送活性解析ツールとして活用することが期待できる。

  • Research Products

    (14 results)

All 2011 2010 Other

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (12 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Thermodynamic Analysis of Interactions between Cofactor and Neuronal Nitric Oxide Synthase2011

    • Author(s)
      Sanae, R., et al.
    • Journal Title

      Biochemistry

      Volume: 50 Pages: 1714-1722

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 時計遺伝子の転写因子NPAS2のヘムドメイン変異体作製とDNA結合活性の解析2010

    • Author(s)
      目黒智美, ら
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2010-12-10
  • [Presentation] 時計遺伝子の転写因子NPAS2のDNA結合能へのpH効果とNAD(P)H効果2010

    • Author(s)
      芳井克洋, ら
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2010-12-10
  • [Presentation] 骨格筋特異的神経型一酸化窒素合成酵素のリン酸化による活性制御機構の解明2010

    • Author(s)
      小笠原昌子, ら
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2010-12-10
  • [Presentation] Mg^<2+>要求性変異株の取得による大腸菌Mg^<2+>輸送系の解析2010

    • Author(s)
      平田智大, ら
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2010-12-09
  • [Presentation] リポソーム再構成系によるシロイヌナズナのCorA familyタンパク質AtMRS2-10のMg^<2+>輸送能解析2010

    • Author(s)
      重見善平, ら
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2010-12-09
  • [Presentation] ギムネマ酸によるStreptococcus mutans由来グルコシルトランスフェラーゼ活性阻害機構の解析2010

    • Author(s)
      武村翔平, ら
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2010-12-07
  • [Presentation] シロイヌナズナのCorA familyタンパク質AtMRS2-10のイオン輸送能解析2010

    • Author(s)
      重見善平, ら
    • Organizer
      日本生物高分子学会2010年度大会
    • Place of Presentation
      兵庫県立大学
    • Year and Date
      2010-09-10
  • [Presentation] ギムネマ酸による3種類のStreptococcus mutans由来glucosyltransferaseの酵素活性阻害効果の解析2010

    • Author(s)
      武村翔平, ら
    • Organizer
      日本生物高分子学会2010年度大会
    • Place of Presentation
      兵庫県立大学
    • Year and Date
      2010-09-10
  • [Presentation] 大腸菌Mg^<2+>要求性変異株の取得2010

    • Author(s)
      平田智大, ら
    • Organizer
      日本生物高分子学会2010年度大会
    • Place of Presentation
      兵庫県立大学
    • Year and Date
      2010-09-10
  • [Presentation] Effect of NO on the transcriptional activity of NPAS2, a transcription factor associated with circadian rhythm2010

    • Author(s)
      芳井克洋, ら
    • Organizer
      The 6th International Conference on the Biology, Chemistry, and Therapeutic Applications of Nitric Oxide
    • Place of Presentation
      京都国際会館
    • Year and Date
      2010-06-15
  • [Presentation] Interaction between neuronal nitric oxide synthase and NADPH analogues2010

    • Author(s)
      早苗隆平, ら
    • Organizer
      The 6th International Conference on the Biology, Chemistry, and Therapeutic Applications of Nitric Oxide
    • Place of Presentation
      京都国際会館
    • Year and Date
      2010-06-15
  • [Presentation] シロイヌナズナ由来CorA familyタンパク質AtMRS2-10のMg2+輸送機能とGMNモチーフMet残基の重要性2010

    • Author(s)
      重見善平, ら
    • Organizer
      日本農芸化学会関西支部 第464回講演会
    • Place of Presentation
      京都府立大学
    • Year and Date
      2010-05-29
  • [Remarks]

    • URL

      http://www2.kpu.ac.jp/life_environ/cell_macromol_chem/ishijima.html

URL: 

Published: 2012-07-19  

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