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2012 Fiscal Year Annual Research Report

HIV治療薬を指向した核酸アプタマーの開発

Research Project

Project/Area Number 22590117
Research InstitutionNagasaki University

Principal Investigator

椛島 力  長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (20274673)

Project Period (FY) 2010-04-01 – 2014-03-31
KeywordsHIV / アプタマー / プロテアーゼ / 薬剤耐性 / 阻害剤 / ウイルス / 感染症 / 変異
Research Abstract

エイズは、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染が原因で発症する感染症である。HIVプロテアーゼは、ウイルスの複製に必要なHIV特有の酵素であり、HIVプロテアーゼを標的とした阻害剤がエイズ治療薬として臨床使用されている。しかし、HIVはRNAをゲノムとして持つため容易に変異を起こし、現在のところ、HIV感染を完治するまでには至っていない。特に、HIVプロテアーゼ遺伝子上の変異は、薬剤耐性と密接に関係しており、別の観点からの治療薬開発が求められている。本研究では、HIVプロテアーゼを認識する核酸アプタマーを開発し、そのエイズ治療薬への応用を目的としている。
HIVプロテアーゼをマルトース結合タンパク質(MBP)との融合タンパク質として大腸菌中で発現させ、アミロースカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーによって、この融合タンパク質を精製した。次に、Factor Xaを用いてMBPタグを切断することによって、mg単位のHIVプロテアーゼを精製した。この精製HIVプロテアーゼは、抗HIVプロテアーゼ抗体によって認識されることを確認した。
また、既報の論文を参考に、薬剤(阻害剤)に抵抗性を示す4種類のHIVプロテアーゼ変異体を作製し、その酵素活性を調べた。その結果、これらの中で2種類の変異体は野生型と同程度の活性を有していることが明らかになった。
今後、精製したHIVプロテアーゼを用いて、これを認識する核酸アプタマーをスクリーニングするとともに、見出した核酸アプタマーが野生型や変異型HIVプロテアーゼの活性を阻害するか調べる予定である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

現在、組換えHIVプロテアーゼの大腸菌中での発現とmg単位での精製に成功している。また、薬剤耐性と関係する変異型HIVプロテアーゼの作製にも成功している。

Strategy for Future Research Activity

精製した組換えHIVプロテアーゼを用いて、核酸ライブラリーの中からHIVプロテアーゼを認識する核酸アプタマーのスクリーニングを行う予定である。その後、得られた核酸アプタマーが、野生型および変異型HIVプロテアーゼの活性を阻害できるか調べる予定である。

  • Research Products

    (16 results)

All 2012

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (14 results) (of which Invited: 2 results)

  • [Journal Article] Inhibition of HIV-1 protease expression in T cells owing to DNA aptamer-mediated specific delivery of siRNA2012

    • Author(s)
      Qinchang Zhu
    • Journal Title

      European Journal of Medicinal Chemistry

      Volume: 56 Pages: 396-399

    • DOI

      10.1016/j.ejmech.2012.07.045

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Selective and sensitive determination of peptides using 3,4- dihydroxyphenylacetic acid as a fluorogenic reagent2012

    • Author(s)
      Hasina Yasmin
    • Journal Title

      Analytica Chimica Acta

      Volume: 721 Pages: 162-166

    • DOI

      10.1016/j.aca.2012.01.035

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Inhibition of the expression of HIV-1 protease in CD4+ T cells owing to DNA aptamer-mediated specific delivery of siRNA2012

    • Author(s)
      Takayuki Shibata
    • Organizer
      The 6th Nagasaki Symposium on Tropical and Emerging Infectious Diseases and The 11th Nagasaki-Singapore Medical Symposium
    • Place of Presentation
      長崎大学(長崎市)
    • Year and Date
      20121210-20121212
    • Invited
  • [Presentation] 真核細胞発現系を用いたプリオンタンパク質の発現と精製2012

    • Author(s)
      中村祐介
    • Organizer
      第29回日本薬学会九州支部大会
    • Place of Presentation
      熊本大学(熊本市)
    • Year and Date
      20121208-20121209
  • [Presentation] マイクロチップ電気泳動を用いた迅速なペプチド検出法の開発2012

    • Author(s)
      松木勝仁
    • Organizer
      第29回日本薬学会九州支部大会
    • Place of Presentation
      熊本大学(熊本市)
    • Year and Date
      20121208-20121209
  • [Presentation] Highly selective and sensitive method for the determination of collagen in mammalian tissue by a novel fluorescence reaction2012

    • Author(s)
      Masaaki Kai
    • Organizer
      The 6th Shanghai international symposium on analytical chemistry
    • Place of Presentation
      上海市(中国)
    • Year and Date
      20121016-20121018
    • Invited
  • [Presentation] DNA aptamer-mediated siRNA delivery inhibits the expression of HIV-1 protease in T cells2012

    • Author(s)
      Qinchang Zhu
    • Organizer
      2012 China-Japan-Korea symposium on analytical chemistry
    • Place of Presentation
      上海市(中国)
    • Year and Date
      20121016-20121018
  • [Presentation] A novel fluorescence derivatization reaction specific for cytosine2012

    • Author(s)
      Dragusha Shpend
    • Organizer
      日本分析化学会第61年会
    • Place of Presentation
      金沢大学(金沢市)
    • Year and Date
      20120919-20120921
  • [Presentation] 真核細胞における組換えHIV-1プロテアーゼの発現と検出法の開発2012

    • Author(s)
      永本佳菜子
    • Organizer
      日本分析化学会第61年会
    • Place of Presentation
      金沢大学(金沢市)
    • Year and Date
      20120919-20120921
  • [Presentation] プロテアーゼ抵抗性プリオンタンパク質の酵素分解の促進2012

    • Author(s)
      室田紗由美
    • Organizer
      第25回バイオメディカル分析科学シンポジウム
    • Place of Presentation
      慶応義塾大学(東京都)
    • Year and Date
      20120808-20120810
  • [Presentation] The potential application of DNA aptamer-mediated specific delivery of siRNA in anti-HIV therapy2012

    • Author(s)
      Qinchang Zhu
    • Organizer
      第25回バイオメディカル分析科学シンポジウム
    • Place of Presentation
      慶応義塾大学(東京都)
    • Year and Date
      20120808-20120810
  • [Presentation] HIV-1プロテアーゼの発現プラスミドの作製と真核細胞での発現2012

    • Author(s)
      永本佳菜子
    • Organizer
      第30回九州分析化学若手の会 夏季セミナー
    • Place of Presentation
      休暇村指宿(指宿市)
    • Year and Date
      20120727-20120728
  • [Presentation] A fluorescence reaction for the sensitive quantification of orotic acid2012

    • Author(s)
      尹 晟
    • Organizer
      第30回九州分析化学若手の会 夏季セミナー
    • Place of Presentation
      休暇村指宿(指宿市)
    • Year and Date
      20120727-20120728
  • [Presentation] A highly sensitive and quantitative assay for collagen in biological sample by a novel fluorescence reaction2012

    • Author(s)
      Yasmin Hasina
    • Organizer
      第72回 分析化学討論会
    • Place of Presentation
      鹿児島大学(鹿児島市)
    • Year and Date
      20120519-20120520
  • [Presentation] プロテアーゼ抵抗性プリオンタンパク質のプロテアーゼ分解における界面活性剤の効果2012

    • Author(s)
      室田紗由美
    • Organizer
      第72回 分析化学討論会
    • Place of Presentation
      鹿児島大学(鹿児島市)
    • Year and Date
      20120519-20120520
  • [Presentation] A novel fluorescence reaction for N-terminal serine-containing peptides and its application to assay of caspase activity2012

    • Author(s)
      Rahman Mohammed Shafikur
    • Organizer
      第72回 分析化学討論会
    • Place of Presentation
      鹿児島大学(鹿児島市)
    • Year and Date
      20120519-20120520

URL: 

Published: 2014-07-24  

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