2012 Fiscal Year Annual Research Report
超多色・超高感度組織蛍光イメージング法によるＴ細胞分化過程の組織学的解析
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22590194
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
鶴井 博理 順天堂大学, 医学部, 助教 (40217386)
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2010-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | 画像分光 / 半導体色素 / 蛍光免疫組織染色 / 超多色蛍光イメージング / サイトカイン染色 |
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| Research Abstract |
本研究課題を達成するために技術要素として、高いS/N比を得るために、抗体に対しクラスター形成を起こさずに半導体色素をコンジュゲート（ラベル化）することが必要であるが、関与する官能基が抗体、半導体色素いずれの側にも複数有り、本質的に困難を含む技術である。
この目的を達成するために抗体のラベル化状態をモニターする方法が必須であり、走査電顕による観察、ゲル濾過クロマトグラフィーによる分子量測定、蛍光相関分光による分子量評価を確立した。
また、コンジュゲーションの方法として、半導体メーカーのeBioscience社より供与された色素を用いて、抗体の側の-NH2基を標的として半導体色素上に-NHS基を付加し結合させる方法と、抗体側の-SH基を標的として半導体色素上に-maleimideを導入する方法を、主として探索した。このいずれの方法も、抗体とコンジュゲートを生成したが、上記モニター法でチェックすると、かなり大きなクラスターを形成していることがわかった。
上記コンジュゲーション法を用いて、マウス脾臓、胸腺、リンパ節等を試料とし、T細胞サブセット分化因子である、FoxP3, GATA3, ROR-gt, T-betを染色し、蛍光画像を得た。また、サイトカインとして、量が比較的多いと思われる、IL-10,TNF-aに関しては蛍光画像を取得できたと判断している。しかし、クラスター形成によりバックグラウンドノイズが高くなることから、それ以外のサイト感に関しては蛍光画像を取得できていない。半導体色素の２大供給元であるモレキュラープローブ社、eBioscence社いずれも、この問題に関し、進捗を示していない。
得られた画像の解釈の枠組みを作る目的で、T細胞の挙動とTCR-pMHC結合自由エネルギーの関係を調べるための、分子動力学に基づくシミュレーションを並行して行い、その発展を企図している。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Lissencephaly with marked ventricular dilation, agenesis of corpus callosum, and cerebellar hypoplasia caused by TUBA1A mutation2013
Author(s)
Okumura A, Hayashi M, Tsurui H, Yamakawa Y, Abe S, Kudo T, Suzuki R, Shimizu T, Shimojima and, Yamamoto T
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Journal Title
Brain and Development
Volume: 35
Pages: 274-279
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Phenotype conversion from rheumatoid arthritis to systemic lupus erythematosus by introduction of Yaa mutation into FcgRIIB-deficient C57BL/6 mice2013
Author(s)
Kawano S, Lin Q, Amano H, Kaneko T, Nishikawa K, Tsurui H, Tada N, Nishimura H,Takai T, Shirai T, Takasaki Y and Hirose S.
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Journal Title
Eur. J. Immunol.
Volume: 43
Pages: 770-778
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Phenotype conversion from RA to SLE in FcγRIIB-deficient B6 mice by Yaa mutation2012
Author(s)
KAWANO Shinya, AMANO Hirofumi, LIN Qingshun, KANEKO Toshiyuki, NISHIKAWA Keiko, OKAZAKI Hideki, TSURUI Hiromichi, NISHIMURA Hiroyuki, SHIRAI Toshikazu, TAKASAKI Yoshinari, HIROSE Sachiko.
Organizer
第41回 日本免疫学会総会・学術集会
Place of Presentation
神戸
Year and Date
20121205-20121207
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[Presentation] The role of SAP-signal in SLE2012
Author(s)
Lin Qingshun, TSURUI Hiromichi, NISHIKAWA Keiko, OKAZAKI Hideki, OHTSUJI Mareki, NISHIMURA Hiroyuki, ONO Masao, SHIRAI Toshikazu, HIROSE Sachiko.
Organizer
第41回 日本免疫学会総会・学術集会
Place of Presentation
神戸
Year and Date
20121205-20121207
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[Presentation] A novel locus of B6 mice on chromosome 12 plays a role in common process shared by SLE, RA, and Sjögren syndrome2012
Author(s)
Kaneko Toshiyuki, AMANO Hirofumi, OHTSUJI Mareki, NISHIKAWA K, KAWANO S, OHTSUJI N, Lin Q, OKAZAKI H, TSURUI H, NISHIMURA H, SHIRAI T, TAKASAKI Y, HIROSE Sachiko.
Organizer
第41回 日本免疫学会総会・学術集会
Place of Presentation
神戸
Year and Date
20121205-20121207
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