ＳＴ２遺伝子多型による構造変化と病気との関連

2012 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 22590289
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 富永 眞一 自治医科大学, 医学部, 教授 (70155571)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 早川 盛禎 自治医科大学, 医学部, 講師 (30326847) ; 為本 浩至 自治医科大学, 医学部, 准教授 (90292630)
• Project Period (FY): 2010-04-01 – 2013-03-31
• Keywords: ST2 / IL-33 / シグナル伝達

Research Abstract

ヒトST2遺伝子産物には、細胞外領域に相当する78番目のアミノ酸がEまたはAになる2つのタイプがある。このアミノ酸変異は、リガンドであるIL-33の結合領域に相当する。本研究では、78番目のアミノ酸の違いが、（1）IL-33とST2の結合の強さに影響するか、（2）IL-33シグナル伝達系に影響するかについて調べた。
（1）分泌型のST2の全長（A78タイプとE78タイプ）にV5エピトープタグとヒスチジンタグをつけたタンパク質をHEK293細胞で発現させニッケルカラムでST2を精製した。IL-33はT7タグとヒスチジンタグ付きで大腸菌で発現し、同じく精製した。IL-33をCM5チップに固定した場合は、アナライトのST2をはがしてチップを再生する過程に問題があり、正確な計測ができなかった。アナライトをはがす操作なしに計測できる装置をもつ医科学研究所の津本教授の研究室に測定を依頼した。E78タイプがA78タイプよりKdが約3倍大きいという結果であった。
（2）E78タイプとA78タイプをコードするヒトST2L発現ベクターをマウス胸腺腫由来細胞にトランスフェクションした後、抗生物質を用いてST2L発現細胞のクローンを選抜した。ヒトIL-33でST2L発現細胞を刺激した後、経時的なMAPキナーゼとNF-κBの活性化をウエスタンブロット法により検出した。リン酸化されたJNK、p38、ERK、およびリン酸化されたNF-κBp65は、E78タイプとA78タイプのいずれにおいても、刺激15分後から検出され、その後徐々に活性化は減弱した。しかしながら、E78タイプとA78タイプにおけるIL-33シグナル伝達経路の活性化に明確な違いは認められなかった。これらの結果から、78番目のアミノ酸変異は、IL-33シグナル伝達系に影響を及ぼさないことが示唆された。

Current Status of Research Progress

Reason

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Presence of a novel exon 2E encoding a putative transmembrane protein in human IL-33 gene. (2013)
  • Author(s): Tominaga, S., Hayakawa, M., Tsuda, H., Ohta, S., and Yanagisawa, K.
  • Journal Title: Biochem. Biophys. Res. Commun. Volume: 430 Pages: 969-974
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2012.12.050
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] YM-175 induces apoptosis of human native monocyte-lineage cells via inhibition of prenylation. (2012)
  • Author(s): Miwa, A., Takezako, N., Hayakawa, H., Hayakawa, M., Tominaga, S., and Yanagisawa, K.
  • Journal Title: Am. J. Hematol Volume: 87 Pages: 1084-1088
  • DOI: DOI:10.1002/ajh.23328
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Regulation of IL-33 expression by IFN-γ and tumor necrosis factor-α in normal human epidermal keratinocytes. (2012)
  • Author(s): Meephansan, J., Tsuda, H., Komine, M., Tominaga, S., and Ohtsuki, M
  • Journal Title: J. Invest. Dermatol Volume: 132 Pages: 2593-2600
  • DOI: DOI:10.1038/jid.2012.185
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Sustained elevation of interleukin-33 in sera and synovial fluids from patients with rheumatoid arthritis non-responsive to anti-tumor necrosis factor: possible association with persistent IL-1β signaling and a poor clinical response. (2012)
  • Author(s): Matsuyama, Y. et al.
  • Journal Title: Rheumatol. Int. Volume: 32 Pages: 1397-1401
  • DOI: 10.1007/s00296-011-1854-6
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Ultraviolet B irradiation induces the expression of IL-33 mRNA and protein in normal human epidermal keratinocytes. (2012)
  • Author(s): Meephansan, J., Komine, M., Tsuda, H., Tominaga, S., and Ohtsuki, M.
  • Journal Title: J. Dermatol. Sci. Volume: 65 Pages: 72-74
  • DOI: 10.1016/j.jdermsci.2011.10.004
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Soluble ST2 protein inhibits LPS stimulation on monocyte-derived dendritic cells. (2012)
  • Author(s): Nagata, A., Takezako, N., Tamemoto, H., Ohto-Ozaki, H., Ohta, S., Tominaga, S., and Yanagisawa, K.
  • Journal Title: Cell. Mol. Immunol. Volume: 9 Pages: 399-409
  • DOI: 10.1038/cmi.2012.29
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Novel splice variants of IL-33: Differential expression in normal and transformed cells. (2012)
  • Author(s): Tsuda, H., Komine, M., Karakawa, M., Etoh, T., Tominaga, S., and Ohtsuki, M.
  • Journal Title: J. Invest. Dermatol. Volume: 132 Pages: 2661-2664
  • DOI: 10.1038/jid.2012.180
  • Peer Reviewed
• [Presentation] ST2遺伝子の選択的スプライシングにおけるトランス因子の解析。 (2012)
  • Author(s): 鴨下信彦、為本浩至、早川盛禎、富永眞一
  • Organizer: 第85回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 20121214-20121216
• [Presentation] IL-33は核内でケラチノサイトの細胞増殖に関与している。 (2012)
  • Author(s): Tsuda, H., Komine, M., Oshio, T., Tominaga, S., Ohtsuki, M.
  • Organizer: 第35回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 20121211-20121214
• [Presentation] IL-33受容体ST2Lの細胞外ドメイン放出。 (2012)
  • Author(s): Tamemoto, H., Kamoshita, N., Kashiwada, M., Hayakawa, M., Ozaki, H., Tominaga, S.
  • Organizer: 第35回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 20121211-20121214
• [Presentation] ヒト単球由来樹状細胞に対する分泌型ST2タンパク質の作用。 (2012)
  • Author(s): Nagata, A., Ohta, S., Tominaga, S., Yanagisawa, K.
  • Organizer: 第35回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 20121211-20121214
• [Presentation] IL-17 up regulates IL-33 expression in keratinocytes; negative feedback loop in psoriatic epidermis. (2012)
  • Author(s): Meephansan, J., Tsuda, H., Komine, M., Karakawa, M., Tominaga, S., Ohtsuki, M.
  • Organizer: The 42nd Annual ESDR (European Society for Dermatological Research) Meeting.
  • Place of Presentation: Venice, Italy
  • Year and Date: 20120907-20120910
• [Presentation] Regulation of IL-33 expression by interferon-gamma and tumor necrosis factor-alpha in normal human epidermal keratinocytes. (2012)
  • Author(s): Meephansan, J., Tsuda, H., Komine, M., Karakawa, M., Tominaga, S., Ohtsuki, M.
  • Organizer: Annual Meeting of the Society for Investigative Dermatology.
  • Place of Presentation: Raleigh, North Carolina, USA
  • Year and Date: 20120509-20120512