2011 Fiscal Year Annual Research Report

マルチパラメータ解析技術を利用した腫瘍マーカーの網羅的解析

Research Project

Project/Area Number	22590334
Research Institution	Yamaguchi University
Principal Investigator	近藤智子 (古屋智子) 山口大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (30379979)
Keywords	セルアレイ / 腫瘍マーカー / サイトメトリー
Research Abstract	本年度は18種類のがん由来の培養細胞を培養し、セルアレイを作成し、10種類の腫瘍マーカーやがん関連遺伝子産物の発現量をレーザースキャニングサイトメーター(LSC)で測定した。セルアレイの作成プロトコールは昨年度の検討でおおむね確立していたが、培養細胞の種類によってはスポッターにセッティングする際の細胞濃度を調整した。1枚のセルアレイには正常細胞(ヒト胎児線維芽細胞由来の培養細胞)を1種類、がん由来培養細胞を9種類、合計10種類の培養細胞をそれぞれ5スポットずつスポットするようにデザインした。自動スポッターを使用し、40枚のセルアレイを作成した(Aセット)。同様の作業を別の9種類のがん由来培養細胞で行い、こちらも40枚のセルアレイを作成した(Bセット)。免疫染色に使用した一次抗体は腫瘍マーカーやがん関連遺伝子産物に対するものを使用した。それぞれの抗体についてAセット、Bセットともに少なくとも2枚のセルアレイスライドグラスに対して蛍光免疫染色を行い、RNase処理後、PI (propidium iodide)で核染色した。染色後のサンプルはLSCで各細胞における免疫染色の強度と核染色強度(核DNA量)を測定した。LSCでは細胞のスライド上の位置情報も同時に取得できるため、セルアレイの全範囲を一度に測定したのちに、各細胞がスポットされている5スポットだけを取り出して解析することが可能であり、それぞれの抗体について、細胞種類ごとにデータを抽出した。このようにして得られたデータについては、現在解析中であるが、まだ測定した細胞の種類や抗体の種類が少ないこともあり、今年度は結論がでていない。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 2年度め終了時において、ほぼ予定通りのデータを得ることができたため。
Strategy for Future Research Activity	最終年度は上半期でさらに多くの細胞種および抗体でデータを得る。下半期はそれらのデータを解析し、腫瘍分類の新しい知見が得られることを目指す。