2012 Fiscal Year Annual Research Report
ヒトメタニューモウイルスのアクセサリー蛋白質と病原性発現の研究
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22590414
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| Research Institution | Shiga University of Medical Science |
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Principal Investigator |
後藤 敏 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (00211920)
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| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | ヒトメタニューモウイルス / アクセサリータンパク質 / 転写複製 / M2-2タンパク質 / インターフェロン / TLR7/9 / IRF7 |
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| Research Abstract |
ヒトメタニューモウイルス（HMPV）M2-2タンパク質の二つの機能（ゲノム転写複製抑制能とIFN-α産生抑制能）の役割を明らかにするため、M2-2ノックアウトウイルスを作製した。本ウイルスを作製するにあたって、M2-2タンパク質特異抗体の作製を最初に試みた。推定アミノ酸配列からM2-2のエピトープ候補領域を明らかにし、その領域の合成ペプチドをウサギに免役し抗血清を得た。本抗血清は合成ペプチドを認識したが、HMPV感染細胞やM2-2タンパク質発現細胞抽出液中のM2-2タンパク質を検出できなかった。そこで本来のHMPV親株の代わりに、FLAGタグをC末端に付加したM2-2タンパク質を発現する組換えウイルスを作製し、本ウイルスを親株としてM2-2タンパク質ノックアウトウイルスを作製することにした。このとき、本ウイルスの感染を容易に追跡できるようM遺伝子とF遺伝子の間に緑色蛍光タンパク質（GFP）遺伝子も導入した。この計画のもとに親株とともにM2-2ノックアウトウイルスの回収に成功した。しかしながら、M2-2ノックアウトウイルスは増殖が悪く、実験可能なレベルの高感染価のウイルス溶液が現在得られていない。今後、高感染価のウイルスを得た後、培養細胞におけるM2-2ノックアウトウイルスのRNA合成、さらに形質細胞様樹状細胞でのIFNα産生を検討したい。
一方、IFNα抑制能の分子レベル解析では抗リン酸化IRF7抗体によるリン酸化IRF7の検出が極めて難しいという問題に直面した。この困難を克服する過程でリン酸化IRF7の極めて興味深い現象を発見した。それは、IRF7はリン酸化されると細胞溶解液不溶性の画分に移動するという現象である。本現象は、これまで報告されておらず、IRF7がどのように活性化され、また、どのように転写因子として働くかについて重要な知見をもたらすものと期待している。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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