2011 Fiscal Year Annual Research Report
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22590429
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
石井 孝司 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 室長 (40280763)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
李 天成 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (90370957)
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| Keywords | ウイルス / 肝臓病 / 病原性 / 治療薬 |
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| Research Abstract |
E型肝炎ウィルス(HEV)に感染したブタ肝臓より組織乳剤を作成し、PLC/PRF/5細胞に感染させ、本細胞で増殖可能なHEV株83-2を取得した。5'端に導入したT7promoterを用いて全長RNAを合成した後、PLC/PRF/5細胞にエレクトロポレーションにより導入したところ、このRNAは細胞内で増殖することが確認された。また、この培養上清をnaiveなPLC/PRF/5細胞に添加したところ、2週間目から培養上清中にHEV抗原蛋白の分泌が確認されたことから、本クローンは感染性を有することが確認できた。この樹立されたHEVの感染性クローンを用いてreverse geneticsの手法によりHEVの感染性を規定する領域の解析、感染細胞内でのウイルス複製機構の解析を実施している。また、LOPAC化合物ライブラリをHEV RNA導入後のPLC/PRF/5細胞に添加し、ウイルス増殖を抑制する化合物のスクリーニングを行っている。同定された化合物の作用からHEV増殖メカニズムの解析を行う予定。
一方、PLC/PRF/5細胞にHEVを感染させ、抗HEV抗体を用いて蛍光抗体染色を行うと、長期間培養後もHEVに感染していない細胞が見られ、この細胞株はヘテロな集団であることが推測された。そのため、single cell cloningを行い、クローニングされた多数の細胞株についてHEVの感染性を調べたところ、増殖性のない細胞株が複数見出された。このスクリーニングにより取得できた、HEVが感染できる細胞とできない細胞の性状を比較解析することにより、宿主側でHEV感染に重要な役割を果たすと考えられる因子の解析を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
HEV感染性クローンの取得に成功し、また、HEVが感染できる細胞とできない細胞のクローニングにも成功している。これらのウイルスcDNAや細胞株を用いて感染性、増殖性の解析を行うことができ、病原性メカニズムの解明に寄与できると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
構築した感染性HEVクローンのcDNAに種々の変異を導入し、RNAを合成して増殖能に対する影響を調べる。増殖に影響を与える変異が導入された領域の機能を調べ、病原性発現メカニズムの解析を行う。また、HEV増殖を阻害する化合物をスクリーニングし、同定された化合物の機能から増殖メカニズムを解析する。一方で、HEVが増殖できない細胞株を用いて、ウイルス増殖に重要な役割を担う宿主側因子の探索を行う。
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[Journal Article] Possible widespread presence of hepatitis A virus subgenotype IIIA in Japan : recent trend of hepatitis A causing acute liver failure2012
Author(s)
Ishii K., Miyamura T., Kanda T., Tawada A., Sekimoto T., Wu S., Nakamoto S., Arai M., Fujiwara K., Imazeki F., Kiyohara T., Wakita T., Yokosuka O.
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Journal Title
Hepatology Research
Volume: 42
Pages: 248-253
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Investigation of epidemiology and HAV genomes regarding three hepatitis A infections that occurred in April-May, 2010-Nagano2011
Author(s)
Yoshida T., Miyasaka T., Azegami Y., Uchiyama Y., Kasahara H., Ueda H., Nagase H., Fujita S., Ishii K., Noda M.
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Journal Title
Japanese Journal of Infectious Diseases
Volume: 64
Pages: 260-261
Peer Reviewed
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[Journal Article] Hepatitis A outbreak associated with a revolving sushi bar in Chiba, Japan : application of molecular epidemiology
Author(s)
Tominaga A., Kanda T., Akiie T., Komoda H., Ito K., Abe A., Aruga A., Kaneda S., Saito M., Kiyohara T., Wakita T., Ishii K., Yokosuka O., Sugiura N.
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Journal Title
Hepatology Research
Volume: (In press)
Peer Reviewed
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[Journal Article] Long-term persistent GBV-B infection and development of a chronic and progressive hepatitis C-like disease in marmosets. Frontiers in Microbiology
Author(s)
Iwasaki Y., Mori K., Ishii K., Maki N., Iijima S., Yoshida T., Okabayashi S., Katakai Y., Lee Y.J., Saito A., Funai H., Kimura N., Ageyama N., Yoshizaki S., Suzuki T., Yasutomi Y., Miyamura T., Karamagi M., Akari H.
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Journal Title
Frontiers in Microbiology
Volume: (In press)
Peer Reviewed
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[Presentation] Long-term persistent GBV-B infection and development of a progressive chronic hepatitis C-like disease in marmosets2011
Author(s)
Akari H., Iwasaki Y., Mori K., Ishii K., Maki N., Iijima S., Yoshida T, Okabayashi S., Katakai Y., Lee Y.J., Saito A.
Organizer
15th International Congress of Virology
Place of Presentation
Sapporo, Japan
Year and Date
20110911-20110916
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