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2011 Fiscal Year Annual Research Report

アポEリッチHDL亜分画の変動とHDLホモジニアス法の反応性との関係について

Research Project

Project/Area Number 22590535
Research InstitutionJuntendo University

Principal Investigator

平山 哲  順天堂大学, 医学部, 准教授 (10345506)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 三井田 孝  順天堂大学, 医学部, 教授 (80260545)
KeywordsApoE-rich HDL / HDL-Cホモジニアス法 / 脂質異常症 / 非変性二次元電気泳動
Research Abstract

【背景】高比重リポ蛋白(HDL)には、ApoE-rich HDLとApoE-poor HDLが存在する。HDL-Cホモジニアス法では、ApoE-rich HDLに対する反応性の試薬間差が存在し、HDL-C測定法の標準化は進んでいない。また、ApoE-richHDLを含むHDL亜分画の長期保存の安定性についての検討は少なく、ApoE-rich HDLを精密に解析する方法も確立されていない。HDL-C測定法の標準化のために、ApoE-rich HDLの血中での特性と臨床的意義を明らかにする必要がある。
【目的】ApoE-richHDL亜分画の分布と長期保存での安定性を明らかにする。
【方法】12時間以上絶食後の正脂血症から、EDTA採血により新鮮血漿を採取した。血漿は0℃で保存し、検体の一部は4℃および-80℃で保存した。保存時間の影響は、0日,2日,7日,43日後に測定して比較した。ApoE-rich HDL亜分画の分布は、非変性二次元電気泳動(一次元目,0.75%アガロースゲル;二次元目,2-15%濃度勾配ポリアクリルアミドゲル)で解析した。HDL亜分画は、NC膜に転写し、抗ApoE抗体と^<125>Iでラベルした二次抗体でApoE-rich HDL亜分画をWB法で検出した。
【結果】正脂血症では、ApoE-richHDLは、粒子サイズの大きい分画と小さい分画の複数が存在した。0℃保存後、保存時間の経過ともに小粒子分画がやや増加した。4℃および-80℃保存では、保存時間の経過とともに小粒子分画が増加した。一方、大粒子分画は、0℃保存では比較的安定であったが、4℃および-80℃保存においては保存時間経過とともにやや減少した。
【結論】ApoE-rich HDLは、大粒子分画のみならず、小粒子分画も存在する。小粒子のApoE-rich HDLは、0℃では比較的安定だが、4℃および-80℃保存では、長期保存の場合にLCATによる粒子の成熟は影響を受け、HDL亜分画の組成は変動する可能性がある。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ApoE-rich HDLの血中での特性を明らかにするために非変性二次元電気泳動を用いた基礎的検討を完了した。正脂血症および脂質異常症でのApoE-rich HDL亜分画の分布と保存安定性についての基礎的データを確認することができた。

Strategy for Future Research Activity

HDL-Cの4つの測定法(CDC法:Heparin-Mn^<2+>、DCM法:Dextran sulfate-Mg^<2+>、13%PEG法、リンタングステン酸Na法)で得た上清と沈殿物中のApoE-rich HDL亜分画を非変性二次元電気泳動で検討する。
また、各種HDL-Cホモジニアス法とApoE-rich HDL亜分画の関係、各種疾患におけるApoE-rich HDL亜分画の変動を明らかにする。研究が計画通りに進まない時は、HDL代謝に関わるLCAT,CETP,PLTPなどの脂質関連酵素をELISA法で測定し、ApoE-rich HDL亜分画との関係を検討する。

  • Research Products

    (11 results)

All 2012 2011

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results) Presentation (7 results)

  • [Journal Article] Small dense LDL cholesterol is a robust therapeutic marker of statin treatment in patients with acute coronary syndrome and metabolic syndrome2011

    • Author(s)
      Fukushima Y, Hirayama S, Ueno T, Dohi T, Miyazaki T, Ohmura H, Mokuno H, Miyauchi K, Miida T, Daida H
    • Journal Title

      Clin Chim Acta

      Volume: 412 Pages: 1423-7

    • DOI

      DOI:10.1016/j.cca.2011.04.021

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Experimental evidence that phenylalanine is strongly associated to oxidative stress in adolescents and adults with phenylketonuria2011

    • Author(s)
      Sanayama Y, Nagasaka H, Takayanagi M, Ohura T, Sakamoto O, Ito T, Ishige -Wada M, Usui H, Yoshino M, Ohtake A, Yorifuji T, Tsukahara H, Hirayama S, Miida T, Fukui M, Okano Y
    • Journal Title

      Mol Genet Metab

      Volume: 103 Pages: 220-5

    • DOI

      DOI:10.1016/j.ymgme.2011.03.019

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cross-sectional study of bone metabolism with nutrition in adult classical phenylketonuric patients diagnosed by neonatal screening2011

    • Author(s)
      Nagasaka H, Tsukahara H, Takatani T, Sanayama Y, Takayanagi M, Ohura T, Sakamoto O, Ito T, Wada M, Yoshino M, Ohtake A, Yorifuji T, Hirayama S, Miida T, Fujimoto H, Mochizuki H, Hattori T, Okano Y
    • Journal Title

      J Bone Miner Metab

      Volume: 29 Pages: 737-43

    • DOI

      DOI:10.1007/s00774-011-0276-6

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] CD36 deficiency predisposing young children to fasting hypoglycemia2011

    • Author(s)
      Hironori Nagasaka, et al
    • Journal Title

      Metabolism

      Volume: 60 Pages: 881-887

    • DOI

      10.1016/j.metabol.2010.08.008

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Quantification of soluble LR11/SorLA in CSF and plasma of patients with Alzheimer disease2012

    • Author(s)
      Takeshi Ikeuchi, Satoshi Hirayama, et al
    • Organizer
      Keystone Symposia on Molecular and Cellular Biology
    • Place of Presentation
      Keystone resort (Colorado, USA)
    • Year and Date
      2012-02-27
  • [Presentation] 微小血管障害性溶血性貧血を合併した胆嚢癌骨髄癌症の1例2011

    • Author(s)
      堀内裕紀, ほか
    • Organizer
      第58回日本臨床検査医学会学術集会
    • Place of Presentation
      岡山コンベンションセンター(岡山市)
    • Year and Date
      2011-11-19
  • [Presentation] 周産期におけるインスリン抵抗性と脂質代謝2011

    • Author(s)
      平山哲, ほか
    • Organizer
      第58回日本臨床検査医学会学術集会
    • Place of Presentation
      岡山コンベンションセンター(岡山市)
    • Year and Date
      2011-11-18
  • [Presentation] 著明な高TG血症を伴うDKAを来した2型糖尿病の1例2011

    • Author(s)
      小原伸雅, ほか
    • Organizer
      第29回内科学会信越地方会
    • Place of Presentation
      ときメッセ(新潟市)
    • Year and Date
      2011-11-05
  • [Presentation] Cholesterol absorption has more close association with LDL-C concentration than cholesterol synthesis in Japanese hypercholesterolemia2011

    • Author(s)
      Satoshi Hirayama, et al
    • Organizer
      第43回日本動脈硬化学会総会
    • Place of Presentation
      ロイトン札幌(札幌,北海道)
    • Year and Date
      2011-07-16
  • [Presentation] The effects of ezetimibe on postprandial hyperlipidemia and endothelial function in patients with type II b hyperlipidemia2011

    • Author(s)
      Yoshifumi Fukushima, Satoshi Hirayama, et al
    • Organizer
      第43回日本動脈硬化学会総会
    • Place of Presentation
      ロイトン札幌(札幌,北海道)
    • Year and Date
      2011-07-16
  • [Presentation] 2型糖尿病患者において食後トリグリセリドの連続10回平均値は頸動脈硬化症の独立した危険因子である2011

    • Author(s)
      出居真由美, ほか
    • Organizer
      第54回日本糖尿病学会年次学術集会
    • Place of Presentation
      ロイトン札幌(札幌,北海道)
    • Year and Date
      2011-05-19

URL: 

Published: 2013-06-26  

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