C型肝炎ウイルス産生調節機構の研究

2010 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 22590731
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 勝二 郁夫 神戸大学, 医学研究科, 准教授 (40356241)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 井出 良浩 神戸大学, 医学研究科, 助教 (70258606)
• Keywords: C型肝炎 / HCV / コア蛋白質 / hnRNPH / hnRNPF / レプリコン / HCV JFH-1

Research Abstract

C型肝炎コア蛋白質に結合する新規宿主因子としてhnRNPH1/H2/Fを同定し、HCV産生調節における役割について解析した。hnRNPHとhnRNPFはアミノ酸レベルで78%の相同性を有し、hnRNPH1とH2はアミノ酸レベルで99%の相同性を有する。HCVコア蛋白質上のhnRNPH1,hnRNPFの結合領域を解析するためにGST-core蛋白質欠損変異体を大腸菌で発現させ、GST-pull down法で解析した。いずれもコア蛋白質のaa 1-43に強く結合することが明らかとなった。hnRNPHおよびhnRNPFはいずれもRNA結合モチーフを有するRNA結合蛋白質であることから、HCV RNAとの相互作用を解析した。ビオチン化したHCV RNAとストレプトアビジンビーズを用いたpull-down法にて解析したところ、hnRNPHとhnRNPFいずれもHCV RNAのIRES IIId領域に特異的に結合することが示された。Huh7細胞内の内在性のhnRNPH1/H2/Fの蛋白質量を比較したところ、Huh7細胞においてhnRNPHは293T細胞と同レベル発現しているが、hnRNPFは293T細胞に比べて著しく発現量が低かった。次に、ウイルス産生における役割を明らかにするために、HCV JFH1株が感染したHuh7細胞に発現プラスミドを用いてhnRNPHまたはhnRNPFを一過性に発現させ、経時的に細胞内外のHCV RNA量およびコア蛋白質量をqRT-PCR法とELISA法にて測定した。hnRNPHを一過性に発現させると培養上清中のHCV感染性粒子産生量が上昇した。一方、hnRNPFを一過性に発現させると培養上清中のHCV感染性粒子産生量が低下した。これらの結果から、hnRNPHとhnRNPFはHCVコア蛋白質およびHCV RNAへの結合能を介して、HCV産生の調節に関与する可能性が示された。hnRNPHはHCV産生を促進性に、hnRNPFはHCV産生を抑制性に制御していることが示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Chaperonin TRiC/CCT participates in replication of hepatitis C virus genome via interaction with the viral NS5B protein. (2011)
  • Author(s): Inoue, Y., Aizaki, H., Hara, H., Matsuda, M., Ando, T., Shimoji, T., Murakami, K., Masaki, T., Shoji, I., Homma, S., Matsuura, Y., Miyamura, T., Lai, MMC, Wakita, T., Suzuki, T.
  • Journal Title: Virology Volume: 410 Pages: 38-47
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 17β-Estradiol inhibits the production of infectious particles of hepatitis C virus. (2010)
  • Author(s): Hayashida K, Shoji, I., Deng, L., Ide, Y-H., Hotta, H.
  • Journal Title: Microbiology and Immunology Volume: 54 Pages: 684-690
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] E6AP ubiquitin ligase mediates ubiquitin-dependent degradation of peroxiredoxin 1. (2010)
  • Author(s): Nasu, J., Murakami, K., Miyagawa, S., Yamashita, R., Ichimura, T., Wakita, T., Hotta, H., Miyamura, T., Suzuki, T., Satoh, T., Shoji, I.
  • Journal Title: Journal of Cellular Biochemistry Volume: 111 Pages: 676-685
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Involvement of PA28γ in the propagation of hepatitis C virus. (2010)
  • Author(s): Moriishi K., Shoji, I., Mori, Y., Suzuki, R., Suzuki, T., Kataoka, C., Matsuura, Y.
  • Journal Title: Hepatology Volume: 52 Pages: 411-420
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Secondary structure of the amino-terminal region of HCV NS3 and virological response to pegylated interferon plus ribavirin therapy for chronic hepatitis C. (2010)
  • Author(s): Sanjo M., Saito, T., Ishii, R, Nishise, Y, Haga, H., Okumoto, K., Ito, J., Watanabe, H., Saito, K., Togashi, H., Fukuda, K., Imai, Y, El-Shamy, A., Deng, L., Shoji, I., Hotta, H., Kawata, S.
  • Journal Title: Journal of Medical Virology Volume: 82 Pages: 1364-1370
  • Peer Reviewed
• [Presentation] E6AP uibiquitin ligase mediates ubiquitin-dependent degradation of peroxiredoxin 1. (2010)
  • Author(s): Shoji I, Nasu J, Murakami K, Miyagawa S, Yamashita R, Ichimura T, Wakita T, Ide Y-H, Hotta H, Miyamura T, Suzuki T, Satoh T.
  • Organizer: 第33回日本分子生物学会年会(BMB2010)
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場(兵庫県)
  • Year and Date: 20101207-20101210
• [Presentation] C型肝炎ウイルスNS5Aに結合するユビキチンリガーゼの同定 (2010)
  • Author(s): 岡田典子、勝二郁夫、甘翔、Deng L、姜大鵬、井出良浩、堀田博
  • Organizer: 第33回日本分子生物学会年会(BMB2010)
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場(兵庫県)
  • Year and Date: 20101207-20101210
• [Presentation] HCVによる糖代謝障害の分子機序 (2010)
  • Author(s): 勝二郁夫、Deng L、堀田博
  • Organizer: 第58回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: あわぎんホール(徳島県)
  • Year and Date: 20101107-20101109
• [Presentation] 糖代謝に及ぼすC型肝炎ウイルスの影響及びその分子機序の解析 (2010)
  • Author(s): Deng L, 兼田崇作、井出良浩、勝二郁夫、堀田博
  • Organizer: 第58回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: あわぎんホール(徳島県)
  • Year and Date: 20101107-20101109
• [Presentation] Molecular mechanism of HCV-induced suppression of glucose transporter (GLUT)2 expression. (2010)
  • Author(s): Shoji I, Kaneda S, Deng L, Ide Y-H, Hotta H.
  • Organizer: 17th International Meeting on hepatitis C virus and related viruses.
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜(神奈川県)
  • Year and Date: 20100910-20100914
• [Presentation] HCV-induced generation of reactive oxygen species leads to Bax-mediated apoptosis through activation of the c-Jun NH_2-terminal kinase signaling pathway. (2010)
  • Author(s): Deng L, Ide Y-H, Shoji I, Hotta H.
  • Organizer: 17th International Meeting on hepatitis C virus and related viruses.
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜(神奈川県)
  • Year and Date: 20100910-20100914
• [Presentation] C型肝炎ウイルス感染は糖新生系を亢進し、糖尿病発症に関与する (2010)
  • Author(s): 堀田博、井出良浩、勝二郁夫
  • Organizer: 第46回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: ホテルメトロポリタン山形(山形県)
  • Year and Date: 20100527-20100528
• [Presentation] Role of the proteasome pathways in the hepatitis Cvirus life cycle (2010)
  • Author(s): Shoji I
  • Organizer: RCC-ERI Seminar
  • Place of Presentation: National Institute of Health, Bankok,(Thailand)(招待講演)
  • Year and Date: 2010-08-20