2010 Fiscal Year Annual Research Report
HNF3β発現誘導性低分子化合物同定による肝再生医療開発
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22590732
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| Research Institution | Tottori University |
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Principal Investigator |
星川 淑子 鳥取大学, 医学系研究科, 助教 (10181489)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
汐田 剛史 鳥取大学, 医学系研究科, 教授 (70263457)
栗政 明弘 鳥取大学, 医学系研究科, 准教授 (80343276)
神吉 けい太 鳥取大学, 医学系研究科, 助教 (10516876)
松本 則子 鳥取大学, 医学系研究科, 研究員 (70457167)
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| Keywords | 肝臓 / 再生医療 |
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| Research Abstract |
われわれは、ヒト間葉系幹細胞株について、Wnt/β-cateninシグナル抑制により内胚葉系の肝細胞へと分化転換可能であることを報告してきた。さらに、肝発生初期に重要である転写因子、HNF3βの発現誘導系を構築し、この転写因子の発現が間葉系幹細胞から機能性肝細胞への効率的分化誘導に寄与することを報告した。本研究は、低分子化合物を用いてHNF3βの発現を誘導することにより、遺伝子操作を伴わない、安全かつ安定な肝細胞誘導技術に基づく肝再生医療を開発することを目的としている。平成22年度は、200種類の天然低分子化合物からなる低分子化合物ライブラリーについて、HNF3β発現誘導性化合物を探索した。一次スクリーニングとして、ウェスタンブロット法によりHNF3βの発現を蛋白質レベルで検討した。ヒト骨髄由来間葉系幹細胞株、UE7T-13を播種後24時間に低分子化合物を0.1または1.0μMの濃度で添加した。さらに24時間培養した後細胞溶解液を調製しウェスタンブロット解析を行った。この結果、5種類の化合物を添加した細胞において低レベルではあるがHNF3βの発現が認められた。二次スクリーニングとして、候補化合物で同様に処理した細胞より全RNAを調製し、RT-PCR法により転写レベルでHNF3β発現誘導能を検討した。この結果、全ての化合物についてHNF3βに対するmRNAの発現上昇が確認された。三次スクリーニングとして、HNF3β発現誘導の濃度依存性、タイムコースおよび細胞毒性について検討した。5種類の候補化合物は細胞毒性を示さなかったが、処理時間を4日間に延長してもHNF3β蛋白質レベルの顕著な上昇は認められなかった。肝細胞分化誘導のためには更なる化合物探索が必要である。
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Research Products
(25 results)
