2011 Fiscal Year Annual Research Report

シェーグレン症候群におけるHTLV-Iの関与について

Research Project

Project/Area Number	22591078
Research Institution	Nagasaki University
Principal Investigator	中村英樹長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (10437832)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	川上純長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (90325639) 中村龍文長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (00198219)
Keywords	シェーグレン症候群 / HTLV-I / ケモカイン
Research Abstract	具体的内容:HTLV-I感染とシェーグレン症候群(SS)発症との間に疫学的には関連がみられるものの、SS唾液腺のアポトーシス陽性率、唾液腺破壊関連分子発現は、HTLV-I感染の有無で有意差はみられなかった。近年HTLV-I関連脊髄症-SS患者唾液腺ではectopic germinal center (GC)が少ないことを見出し、その病態にCXCL13が関与していた。またウイルス感染と自然免疫の関与が注目されており、SS唾液腺におけるtoll-like receptor (TLR)の発現を報告した。今回、口唇生検で得られたSS唾液腺培養上皮細胞をTLR2-4のリガンドで刺激し、燐酸化Akt発現増強を伴うTLR2/3発現がみられた。また、TLR3リガンドであるPolyIC刺激ではSS、正常コントロール唾液腺上皮細胞共に有意な核断片化がみられ、TUNEL染色によりアポトーシスであることを確認した。ヘキスト染色による核断片化像に一致してTLR3および燐酸化Aktの共発現がみられた。TUNEL染色陽性数・caspase3断片化はそれぞれ画像解析ソフトおよびWBによる検討によりPI3K inhibitorによりむしろ有意に抑制された。また、PolyIC刺激により唾液腺上皮細胞にはSAPK/JNKおよびMAP kinaseの活性化がみられたが、正常コントロールに比して、SSの活性化のほうがより増強していた。意義=代表的な自然免疫レセプター分子であるTLRのうち、TLR3を介したSS唾液腺破壊が示された。ウイルス感染等防御機構の受け皿であるTLRの下流シグナル伝達により、細胞死が起こることが明らかとなった。細胞死に伴って一部のMAPKがSSでより強く活性化されることも見出した。重要性:自然免疫を介する唾液腺破壊機序の一端が明らかとなった。この結果はHTLV-Iなど外来微生物感染によって、唾液腺細胞死が制御されている可能性を示唆している。現在実際にHTLV-Iが唾液腺細胞に感染しうるかの検討を行っているが、この際に、TLRおよび関連蛋白がどう発現するかを見るための足掛かりになると思われる。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 生検で得られた小唾液腺組織を使用するため、研究が生検頻度に依存している。また、初代培養であるために、細胞の生着率が悪い場合、HTLV-I感染細胞との共培養に十分耐えきれない場合が見られる。
Strategy for Future Research Activity	HTLV-Iが口唇生検で得られた唾液腺上皮細胞に感染しうるのかを確認しGAG蛋白などHTLV-Iの構成蛋白質に対するモノクローナル抗体を用いた蛍光免疫染色を行い、唾液腺上皮細胞上の感染頻度を検討する。感染上皮細胞について、細胞死抑制蛋白発現を検討する。さらに、HTLV-I1エフェクター細胞と、唾液腺上皮細胞上のCXCL12/13の発現も検討する。生検で得られた唾液腺上皮細胞の生育を確保するために、得られた唾液腺組織を幾つかのブロックに分けて複数個で培養するなどの工夫が必要と考えられる。