2011 Fiscal Year Annual Research Report
白血病における新規JAK2関連融合遺伝子の同定とその分子病態の解明
| Project/Area Number |
22591172
|
|---|
| Research Institution | Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research |
|---|
Principal Investigator |
川村 眞智子 財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 研究員 (80450592)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
滝 智彦 京都府立医科大学, 医学系研究科, 講師 (50322053)
|
|---|
| Keywords | JAK2遺伝子 / 白血病 / 染色体転座 / 融合遺伝子 |
|---|
| Research Abstract |
研究の目的 : 本研究は、t(9 ; 17)(p24 ; q23)を持つ難治性急性リンパ性白血病(ALL)の発がん機構を解明し、その治療開発への糸口をつかむことである。
t(9 ; 17)(p24 ; q23)ALLのJAK2の融合相手遺伝子の同定 : 患者白血病細胞からJAK2を挟む2つのBACクローンを用いてダブルカラーFISHを行い、この転座にJAK2遺伝子の関与を確認した。JAK2遺伝子は、B41(594-1305)、SH2(1686-1956)、STK(2130-2910)、TK(3042-3864)の4つから構成され、正常血液細胞と白血病細胞各々をPCRで増幅し,正常細胞では全てが増幅されたが,白血病細胞ではB41,SH2の部分は増幅されなかった。したがってSTKより上流でSH2までの間に切断点があると考えた。これはJAK2関連白血病で、t(9 ; 12)(p24 ; p13)ALLからTEL-JAK2融合(Science 278 : 1309,1997)、t(8 ; 9)(p22 ; p24)CMLからPCM1-JAK2融合(Oncogene 24 : 7248,2005)、t(9 ; 22)(q34 ; q11.2)CMLからBCR-JAK2融合(Genes Chromosomes Cancer 44 : 329,2005),t(5 ; 9)(q14.1 ; p24.1)ALLからSSBP2-JAK2融合(Genes Chromosomes Cancer 47 : 884,2008)の報告と一致した。cDNABubble PCR法(Oncogene 27 : 2249,2008)で融合遺伝子が同定できなかったため、Annealmg Control Primerで既知配列近傍の未知領域をPCRで増幅するDNA Walking法を用い複数の候補遺伝子増幅産物を得たが、行ったクローニングでは仮定した17q23上の遺伝子は同定できていない。またCap構造に特異的に結合するCapFishing adaptorとOligo dT adaptorを使用し、RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)を行い5'末端を含む一本鎖cDNAを合成しクローニングする方法を準備中である。
今後の研究実施計画 : 引き続きJAK2遺伝子の転座相手の同定を行う。FISH法を用いたJAK2転座のスクリーニングシステムの構築と未知JAK2転座陽性白血病の抽出、新規融合遺伝子および転座相手遺伝子の機能解析、白血病検体を用いたマイクロアレイ解析を行い関連遺伝子を探索し分子標的治療法への応用の可能性を探索する。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初予定していたJAK2遺伝子の融合している相手遺伝子の同定に予定よりも時間を要している。cDNA Bubble PCR法(Oncogene 27 : 2249,2008)で、制限酵素で消化される部位付近に切断点がある場合、転座相手を同定できない場合がある。この方法では融合相手遺伝子の同定できなかったため,原理の異なった他の2つの方法、DNA walking Speed Up Premix kitとFishing Full-length cDNA Premix kit(Seegene)を使って転座相手の遺伝子の同定を急いでいる。
|
| Strategy for Future Research Activity |
FISH法で、JAK2遺伝子が切断されているということを証明した。転座の相手遺伝子の同定は、23年はAnnealing Control Primerを利用し既知配列近傍の未知領域をPCRで増幅するDNA Walking法を用い複数の候補遺伝子増幅産物を得たが、これまで行ったクローニングでは仮定している17q23上の遺伝子は同定できていない。残りのクローニングも行っていく。またCap構造に特異的に結合するCapFishing adaptorとoligo dT adaptorを使用して,RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)を行い5'末端を含む一本鎖cDNAを合成しクローニングする方法も準備中である。
|
