2011 Fiscal Year Annual Research Report
脂肪組織由来幹細胞による肝再生調節機構の解明に関する研究
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22591506
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
森根 裕二 徳島大学, 病院, 助教 (60398021)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
島田 光生 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (10216070)
宇都宮 徹 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 准教授 (30304801)
居村 暁 徳島大学, 病院, 助教 (90380021)
池本 哲也 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助教 (20398019)
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| Keywords | 肝不全 / 幹細胞 / 肝再生制御因子 / 肝切除 / 肝移植 |
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| Research Abstract |
脂肪組織由来幹細胞による肝再生調節機構の解明に関する研究
背景・目的)肝切除術や肝移植における術後肝不全の克服に対し、脂肪組織由来粗疾患細胞(AT-MSC)が肝再生過程における肝・類洞・胆管細胞などの細胞源(多分化能)となり、肝再生調節機構としての幹細胞の役割について検討する。
前回までの結果)
1.Celution System^[○!R]により、ヒト皮下脂肪組織から抽出したADRCはActivin A、HGF、FGF等を含む培地にて培養約4週間で肝細胞様の形態を呈した細胞へ分化し、ADRC脾注により術後4週の残肝に抗HLA-1抗体及び抗human albumin抗体陽性細胞を認めた。
2.マウス肝細胞(1.0×105 cells/well)を、ADRC(1.0×105 cells/well)とcell-cell contact(-)共培養し、肝細胞のviabilityが共培養群で良好で(肝細胞単独群vs ADRCs共培養群1.1±0.2% vs 16.6±2.1% in day7)、培養液中のVEGFが共培養群で有意に上昇していた。
今年度の結果)
3.ba1b/c nu-nuマウスに70%Hx施行後、heparin併用下にADRC(1.0×105 cells)を経静脈的に投与(コントロール群:heparinのみ投与)し、肝機能はheparinのみ投与群と比較して有意に改善し(heparinのみ投与群vs heparin+ADRC投与群:血清GPT 848±75 vs.615±82)、さらに肝再生率の上昇とともにADRCの再生肝への強い集積をIVIS^[○!R]、Neo-Stem^[○!R]により確認した。
4.ba1b/c nu-nuマウスに70%Hx+15min肝虚血施行後(I/R)、sham群・Hx+I/R群・Hx+I/R+ADSC投与群に分け検討したところADSC homing(集積)に関与するSDF-1はADSC投与に関わらず、sham群と比較して術後6時間で肝内発現していることをreal time PCRにて確認した。またCXCR4はADSC投与群の残肝おいてのみ強発現していた。さらに免疫染色により術後6時間では肝細胞、24時間では類洞内皮細胞に強発現していることも確認できた。
今後の予定)
再生肝へ集積している幹細胞の分化形態・機能解析。90%大量肝切除・30%肝移植モデルによる肝不全改善効果(生存率の改善)、幹細胞分化効果、さらに各肝構成細胞分離により機能解析する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
上記実験系において脂肪由来幹細胞の肝細胞保護効果・肝集積(Homing)効果を確認し、それらがvitroにおいてcell-cell contactなしに、液性因子により制御されていることも判明した。さらにvivoにおける幹細胞の肝集積にCXCR4-SDF-1経路が重要であるとともに、肝構成細胞における発現の差異についても示唆に富む結果が得られ、これらについて学会報告を行った。
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| Strategy for Future Research Activity |
H24年度は、上記結果を踏まえて90%大量肝切除・30%肝移植モデルにおける脂肪由来幹細胞の肝集積・肝細胞保護効果(各種肝構成細胞への分化誘導効果)を引き続き検討する。肝切除後(GFP labeling幹細胞移入後)経時的に再生肝を採取し、幹細胞の分化誘導を確認する。
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