2012 Fiscal Year Annual Research Report
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22591603
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| Research Institution | Akita University |
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Principal Investigator |
菅原 卓 秋田大学, 医学部, 講師 (80241660)
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| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | 脊髄損傷 / 運動ニューロン / グリシン / ＤＮＡ損傷 |
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| Research Abstract |
１．正常マウス，高・低グリシンマウスの脊髄組織でのグリシン量の測定
遺伝子組み換えマウスのバックグラウンドはC57BL/6であり，マウス組織内でのグリシン量を正常C57BL/6マウス，高・低グリシンマウスの3群で比較した(n = 6)．マウスの選定は血液より抽出したDNAをテンプレートとし，PCR法で遺伝子組み換え部分を増幅した後，PCR産物を2%アガロースゲルで電気泳動して決定した．
２．脊髄損傷モデルの評価
上記3群のマウス (27-30g)をisoflurane 2%, 酸素30%,笑気70%の吸入麻酔下に腹臥位にして胸腰椎移行部に正中切開をおいた．ついで第13胸椎椎弓を切除し，腰髄膨大部を露出した．腰髄膨大部を血管クリップ（把持力15g，5秒間）で圧迫した．術中はhomeothermic blanketを用いて直腸温を36.5-37.5度に調節した．
３．脊髄損傷の評価
血管クリップにより脊髄損傷を作成し、1, 2, 3, 5日後にマウスをpentobarbital 50mg/kgで腹腔内麻酔し，3.7% formaldehydeを含むPBSで潅流した．24時間同じ溶液で後固定を行った後，厚さ5ミクロンの脊髄矢状断・横断パラフィン切片を作成し，cresyl violet染色とhematoxylin-eosin染色を行った．脊髄内部には大きなのう胞形成や出血などの所見はなく、脊髄前角運動ニューロンは脊髄損傷後2-3日で細胞死を起こした。これらの細胞には核クロマチンの凝縮、TUNEL陽性といったアポトーシス特有の所見がみられた。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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