2010 Fiscal Year Annual Research Report
虹彩由来網膜幹/前駆細胞の効率的培養法の樹立と分化細胞の生理学的機能評価
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22591970
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
山本 直樹 藤田保健衛生大学, 共同利用研究施設, 講師 (00267957)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
谷川 篤宏 藤田保健衛生大学, 医学部, 准教授 (40324412)
堀口 正之 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (70209295)
大熊 真人 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (50329710)
宮地 栄一 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (90129685)
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| Keywords | 網膜再生 / 組織幹/前駆細胞 / p75NTR(CD271) / 網膜神経細胞 / 虹彩 / Cell Sort / 電気生理 / 幹細胞移植 |
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| Research Abstract |
マウスおよびヒト虹彩由来網膜幹/前駆細胞の効率的な継代維持培養法に関する研究結果として、虹彩を酵素処理して単離した様々な細胞を培養したところ、神経様細胞へ分化できる細胞とできない細胞(fibroblast様細胞)が混在することが明らかとなった。そこで、単離した虹彩由来細胞において、未熟な幹/前駆細胞は接着能力が高いという細胞特性を利用して短時間で培養ディッシュに接着した細胞のみを継続培養したところ、効率的に神経細胞への分化能を有する細胞が取得できるようになった。培地のコンディションは、ヒトプール血清、FBS、血清代替品、Growth Factorなどを含む基礎培地にTAT-Pep5などのApoptosisシグナル系阻害剤を添加することで、CD29、CD105、Sca-1などの幹細胞マーカーを発現する細胞が継代培養できるようになり、さらに一部の幹細胞マーカーは12継代まで保持できることが明らかとなった。平成23年度以降、さらに様々な因子の添加による網膜幹/前駆細胞における効率的な維持培養法を検討する。この組織幹細胞培養法が確立できれば,眼科領域のみならず自己の組織幹細胞を用いた様々な領域の再生医学・医療研究に大きく貢献することができる。
分化誘導細胞を用いてPatch Clamp法で検討した結果、レチノイン酸を分化誘導薬剤として用いた場合では、神経細胞に特異的な電位依存性Na^+チャネル(内向き電流)の発現を一部の細胞で確認できた。平成23年度以降、さらに様々な分化誘導条件の検討し、機能性網膜神経細胞への分化誘導に関する研究を継続して実施する。
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[Journal Article] Age-related changes of p75 Neurotrophin receptor-positive adipose-derived stem cells.2010
Author(s)
Yamada T., Akamatsu H., Hasegawa S., Yamamota N., Yoshimura T., Hasebe Y., Inoue Y., Mizutani H., Uzawa T., Matsunaga K., Nakata S.
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Journal Title
J Dermatol Sci.
Volume: 58(1)
Pages: 36-42
Peer Reviewed
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[Presentation] ヒト角膜輪部由来角膜上皮細胞の分離・培養2010
Author(s)
山本直樹, 平野耕治, 小島肇, 綾木雅彦, 住友万里子, 山下宏美, 大野亜由美, 田島香里, 谷川篤宏, 谷口孝喜, 堀口正之
Organizer
日本組織培養学会第83回大会
Place of Presentation
岡山
Year and Date
20100520-20100521
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