2010 Fiscal Year Annual Research Report
in vitro発がんモデルを用いた口腔がん発生機構の解析
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22592249
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| Research Institution | Hyogo Medical University |
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Principal Investigator |
野口 一馬 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (50309473)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
浦出 雅裕 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (70104883)
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| Keywords | 口腔がん / 中咽頭がん / ヒトパピローマウイルス |
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| Research Abstract |
ヒト正常舌角化細胞を用いたin vitro発がん系の確立
まず、HPV陽性およびHPV陰性口腔がんの遺伝子導入型in vitro発癌モデルの作成を行った。HPV陽性モデルではLXSN-16E6E7,MSCV-bsd-KrasV12,MSCV-bsd-Hras, MSCV-CLXPpuro-c-mycをさまざまな組み合わせで遺伝子導入した。また、hTERT, cyclinD1およびhuman mutant Cdk4(Cdk4R24C : an inhibitor resistant form of Cdk4)の3遺伝子をベクターであるCSII-CMV-RfAに挿入し、CSII-CMV-hTERT,-cyclinD1,-hCDK4R24Cを作成し、ヒト正常舌角化細胞HTK1に感染させ、hTERT、cyclinD1、CDK4を遺伝子導入し、がん化する組み合わせを検討した。その結果、HPV陽性系ではHPV16型のE6とE7の変異は必須であり、H-rasおよびc-myc遺伝子の活性化でがん化することが分かった。HPV陰性系のがん化ではhTERT, cyclinD1,CDK4に加えてp53の不活化が必須であることが確認された。樹立された癌細胞はコロニー形成法、ヌードマウス造腫瘍能、raft cultureによる3次元培養法により、がんとしての性質を獲得したことを確認した(投稿準備中)。
口腔および中咽頭がん腫瘍組織におけるHPVの関与
口腔および中咽頭側壁(扁桃原発)癌の病理組織診断のための組織採取を行う際に組織の-部を-80℃で保存し、DNAを抽出、採取したDNAをmultiplex PCR(KURABO Industries)を用いて解析し、ハイリスクHPVの発現を検討した。その結果、中咽頭がんのでは従来の報告通りハイリスク型HPVの関与が確認されたが、口腔がんにおけるHPVの関与は認められず、口腔発がんにおけるHPVの関与は極めて低いと考えられた(投稿準備中)。
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