iPS細胞による舌再生とmiRNAの機能:再生療法への展開

2011 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 22592300
• Research Institution: Tsurumi University
• Principal Investigator: 福井 只美 鶴見大学, 歯学部, 助教 (10267544)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中村 芳樹 鶴見大学, 歯学部, 教授 (10097321) ; 山根 明 鶴見大学, 歯学部, 教授 (20166763)
• Keywords: iPS細胞 / 舌 / 再生 / 器官培養法 / アンチセンス / in situ hybridization法 / Real-time PCR法 / miR-1

Research Abstract

昨年度は舌筋の発生・分化過程におけるmiRNAの機能を明らかにする実験を行った。
胎齢11～15日のマウスより舌を摘出し、RNAを分離・精製し、Real time PCR法を用いて、miR-1、24、133、181の面R蝋の発現量を測定した。胎齢11～15日のマウスより舌を摘出し、4%パラフォルムアルデヒドで固定し、Whole mountのmiRNA in situ hybridization法によりmiR-1の舌における分布を解析した。続いて凍結切片を作成し、miRNA in situ hybridization法を用いてmiR-1の筋組織内での分布を解析した。胎齢12～15日のマウスより舌を摘出し、器官培養を行った。培養液にMorpholinoOligonucleotideAnもisenseを添加した。培養終了後、骨格筋の分化マーカーである齪R-1、myogenin、muscle creatine kinase(MCK)の発現をReal-time PCR法より解析した。
miR-133a、miR-199a3p、miR-199a5pは胎齢11,12,13日に大量に発現し、その後減少した。miR4、miR-24は発生の進行に伴って発現が増加し、胎齢13～15日に大量に発現していた。miR-181は胎齢11～15日で発現量が大きく変化しなかった。Whole mountのmiRNA in situ hybridization法によるとmiR-1は舌全体に分布していることが、凍結切片を用いたmiRNA in situ hybridization法によるとmiR-1は舌筋組織に分布していることが明らかになった。アンチセンスを添加して培養した舌においてはmiR-1の増加は抑制されていたが、MCK、Myogeninの増加は抑制されていなかった。
以上の結果から、miR-1は舌筋細胞の分化に何らかの役割を果たしているが、C2C12培養筋芽細胞などとは異なった役割を果たしていることが示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Association between the lack of teeth and the expression of myosins in masticatory muscles of microphthalmic mouse (2012)
  • Author(s): NARIYAMA, M., KOTA, Y., KANEKO, S., ASADA, Y., YAMANE, A.
  • Journal Title: Cell Biochem.Func. Volume: 30 Pages: 82-88
  • DOI: 10.1002/cbf.1821
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The function of platelet derived growth factor in the differentiation of mouse tongue striated muscle (2012)
  • Author(s): SUZUKI, E., AOYAMA, K., FUKUI, T., NAKAMURA, Y., YAMANE, A.
  • Journal Title: Orthod.Craniofac.Res. Volume: 15 Pages: 39-51
  • DOI: 10.1111/j.1601-6343.2011.01535.x
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Autophagic-lysosomal pathway functions in the masseter and tongue muscles in the klotho mouse, a mouse model for aging (2011)
  • Author(s): IDA, R., KANEKO, S., SUGA, T., MORITO, M., YAMANE, A.
  • Journal Title: Mol.Cell.Biochem. Volume: 348 Pages: 89-98
  • DOI: 10.1007/s11010-010-0642-z
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Bone morphogenetic protein-2 functions as a negative regulator, but not as an inducer for the formations of cartilage and bone in cultured tongue, in the differentiation of myoblasts in mouse embryonic tongue (2011)
  • Author(s): AOYAMA, K., YAMANE, A., SUGA, T., SUZUKI, E., FUKUI, T., NAKAMURA, Y.
  • Journal Title: BMC Dev.Biol. Volume: 44 Pages: 11
  • DOI: 10.1186/1471-213X-11-44
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Changes in triacylglycerol-accumulated fiber type, fiber type composition, biogenesis in the mitochondria of the soleus muscle in obese rats (2011)
  • Author(s): KANEKO, S., IIDA, R., SUGA, T., FUKUI, T., MORITO, M., YAMANE, A.
  • Journal Title: Anat.Rec. Volume: 294 Pages: 1904-1912
  • DOI: 10.1002/ar.21472
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] IGF and myostatin pathways are respectively induced during the earlier and the later stages of skeletal muscle hypertrophy induced by clenbuterol, a β2-adrenergic agonist
  • Author(s): ABO, T., IIDA, R., KANEKO, S., SUGA, T., YAMADA, H., HAMADA, Y., YAMANE, A.
  • Journal Title: Cell Biochem.Func. Volume: (In press)
  • Peer Reviewed
• [Presentation] アンチセンスによるmiR-1の発現抑制がマウス胎仔の舌筋発生に及ぼす影響 (2011)
  • Author(s): 幕内俊介、山根明、大久保力廣
  • Organizer: 第74回鶴見大学歯学会例会
  • Place of Presentation: 鶴見大学会館、神奈川
  • Year and Date: 2011-12-17
• [Presentation] マウス胎仔の舌発生とmicroRNAの発現変化 (2011)
  • Author(s): 幕内俊介、山根明、大久保力廣
  • Organizer: 日本補綴歯科学会第120回記念学術大会
  • Place of Presentation: 広島国際会議場、広島
  • Year and Date: 2011-05-22