2010 Fiscal Year Annual Research Report
ソフトバイオマス完全糖化を目指したデザイナブルセルロソームの基盤研究
| Project/Area Number |
22612001
|
|---|
| Research Institution | Mie University |
|---|
Principal Investigator |
三宅 英雄 三重大学, 大学院・生物資源学研究科, 助教 (50362364)
|
|---|
| Keywords | セルロソーム / セルロソーム骨格タンパク質 / Clostridium cellulovorans / CbpA / CbpB / Clostridium acetobutylicum |
|---|
| Research Abstract |
Clostridum cellulovoransは、セルロソームと呼ばれる骨格タンパク質をベースに、多数のセルラーゼやヘミセルラーゼなどの多糖分解酵素が結合した酵素複合体を形成し、効率よくセルロース系バイオマスを分解することができる。本菌ゲノム解析の結果、セルロソームを構成できる4種類の骨格タンパク質遺伝子CbpA、HbpA、CbpRおよびCbpCを確認した。CbPBとCbpCは新規遺伝子であり、CBM、SLH、コヘシンの3bpのドメインから構成されている。初年度は、CbpBとCbpC遺伝子をサブクローニングして組換えタンパク質を作製し、元菌におけるタンパク質レベルでの発現解析を行った。
CbpBとCbpC遺伝子をゲノムからサブクローニングを行い、発現ベクターpET-22b(+)に組み込んだ。構築したプラスミドを大腸菌BL21L(DE3)株に形質転換し、組換えタンパク質を作製した。CbpBは1つのCBM、SLH、コヘシンから構成されるので、結晶性セルロースであるAvicelを用いたアフィニティークロマトグラフィーで精製し、さらにイオン交換クロマトグラフィーによって、SDS-PAGEで単一バンドになるまで精製を行った。さらに、組換えCbpBに対する抗体を作製し、ウェスタンブロット法によるCbDBの検出を行った。その結果、培養上清からCbDBが検出された.以下の結果から、C. cellulovoransはChDAを含む巨大なセルロソームを構築するだけなく、1種類のサブユニットを塔載できるCbDBによるセルロソームを発現することが示唆された.次年度は、これらのセルロソーム骨格タンパク質をブタノール生産菌であるClostridium acetobutyllcumに導入する予定である。
|
Research Products
(10 results)
-
-
[Journal Article] Comparison of the mesophilic cellulosome-producing Clostridium cellulovorans genome with other cellulosome-related clostridial genomes2011
Author(s)
Tamaru, Y., Miyake, H., Kuroda, K., Nakanishi, A., Matsushima, C., Doi, R.H., Ueda, M
-
Journal Title
Microbial Biotechnology
Volume: VOL4
Pages: 64-73
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
-
-
